[發(fā)明專利]一種梧桐花揮發(fā)油的制備方法及其抗腫瘤應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410266749.0
• 申請日: 2014-06-16
• 公開（公告）號: CN104069138A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉東鋒;楊成東
• 申請（專利權(quán)）人: 南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: A61K36/185
• 分類號: A61K36/185;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種梧桐花揮發(fā)油的制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

梧桐，又名青桐，屬梧桐科落葉喬木。其根、皮、葉和花都具有一定的藥用價值。梧桐花，性味甘平無毒，人肝、腎、肺三經(jīng)，有清熱解毒、祛風除濕、利尿消腫等功效。主治水腫、禿瘡、燒燙傷等病癥。目前，國內(nèi)對梧桐子、葉和花粉的藥理作用均有研究，但關(guān)于梧桐花中揮發(fā)油的提取方法鮮有報道。研究表明，梧桐花揮發(fā)油化學成分較多，含有大量的烷烴類以及血卟啉和紫衫紫素，近些年來，不少學者對這兩種化合物進行了大量的研究，發(fā)現(xiàn)血卟啉主要用來治療惡性腫瘤等；紫衫紫素對膠質(zhì)瘤細胞的生長具有明顯的抑制作用。因此，梧桐花揮發(fā)油具有很好的應(yīng)用價值，可應(yīng)用于醫(yī)藥、保健品等行業(yè)。?

現(xiàn)有提取梧桐花揮發(fā)油的報道并不多見，超臨界CO₂萃取梧桐花揮發(fā)油成分，耗時少，收率高，提取的成分也較多，防止了揮發(fā)油的氧化、熱解以及提高了揮發(fā)油的品質(zhì)，且提取的揮發(fā)油無有機試劑，無毒副作用，可以直接用于食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種梧桐花揮發(fā)油的制備方法及其抗腫瘤應(yīng)用。

為了達到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種梧桐花揮發(fā)油的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

a.將梧桐花陰干、粉碎，過40目篩，得到梧桐花粉末；

b.將梧桐花粉末放入萃取釜中，設(shè)置萃取壓力為25~35MPa、萃取溫度40~50℃，分離釜Ⅰ壓力10~15MPa、溫度30~40℃，分離釜Ⅱ壓力5~10MPa、溫度20~30℃，CO₂流量為20~30kg/h；

c.經(jīng)過2~3h的萃取，減壓去除CO₂后收集萃取物，即可得到梧桐花揮發(fā)油。

本發(fā)明制備方法制得的梧桐花揮發(fā)油在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明制備方法制得的化合物進行抗腫瘤活性實驗表明：該化合物具有較強的抗腫瘤活性，在天然新藥開發(fā)中具有良好的應(yīng)用前景。

本發(fā)明制得的梧桐花揮發(fā)油采用MTT法（四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法）進行抗腫瘤活性測試。

試驗用細胞株：

T-98和U251-SP：人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞株；HLE：人肝癌細胞株；MM1-CB和HMV-1：人黑色素瘤細胞株。

?方法：（1）0.25%胰酶消化對數(shù)生長期細胞，10%NBS的RPMI?1640調(diào)細胞濃度50000個/ml。96孔板100ul/孔。設(shè)溶劑對照，每組3平行孔。37℃，5%CO?2?、95%空氣的培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)24h，棄上清。

（2）加藥物5個10倍稀釋的濃度（溶劑為有二甲亞砜和水)，為10^?-4?mol/L。

（3）細胞連續(xù)培養(yǎng)48h，每孔加入10μl?5mg/ml的?MTT溶液（以無血清培養(yǎng)基配制），繼續(xù)培養(yǎng)4h。

（4）吸去上清。加入200μl?DMSO，輕輕振蕩以使甲臜完全溶解。570nm處用酶標儀測定OD值。

（5）計算抑制率(%)=（對照OD-藥物OD）/對照OD*100%?

實驗結(jié)果：本發(fā)明化合物的抑制率以相對于對照（添加DMSO）的結(jié)果如下表1表示。

表1?梧桐花揮發(fā)油的腫瘤細胞增值抑制率%