[發明專利]一種防風草二內酯的制備方法及抗腫瘤應用

在審

• 申請號: 201410266403.0
• 申請日: 2014-06-16
• 公開（公告）號: CN104072513A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發明（設計）人: 劉東鋒;楊成東
• 申請（專利權）人: 南京澤朗醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07D493/08
• 分類號: C07D493/08;A61K31/365;A61P35/00
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明公開了一種植物提取物的制備方法及應用，特別涉及一種防風草二內酯的制備方法及抗腫瘤應用。

背景技術

防風草二內酯（Ovatodiolide），分子式為C20H24O4，分子量為328.41，結構式為

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防風草二內酯來源于唇形科(Labiatae)?防風草Anisomeles?indica?(L.)O.Ktze.的葉。防風草二內酯具有細胞毒活性，對KB細胞的IC50為0.6μg/mL；具有降壓作用，抑制離體蛙心的收縮和Ca²⁺流，引起狗短暫的降壓作用，但不抑制血管緊張素轉換酶(ACE)。抑制心肌收縮，桔抗鈣離子流。

目前，尚未見高含量防風草二內酯的制備方法及其抗腫瘤應用的相關專利報道。

發明內容

為滿足臨床需要，擴大用藥品種，更好地治療癌癥，，提供一種防風草二內酯的制備方法及抗腫瘤應用。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種防風草二內酯的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）提?。喝》里L草葉粉碎成粗粉，加入90%乙醇溶液，65℃下進行連續逆流超聲提取，得到乙醇提取液；

（2）氧化鋁柱層析：上述提取液濃縮至浸膏，加氧化鋁拌勻、干燥后裝柱，用氯仿-甲醇混合溶液洗脫，薄層檢測，收集防風草二內酯流分，濃縮干燥得到防風草二內酯粗品；

（3）制備型液相色譜分離：上述粗品采用制備型液相色譜分離，紫外檢測器在線監測，收集防風草二內酯組分，將洗脫液旋轉蒸發濃縮，得防風草二內酯粗晶；

（4）重結晶：將防風草二內酯粗晶用丙酮重結晶，冷凍干燥得到高純度防風草二內酯結晶。

步驟（1）所述乙醇溶液用量為藥材的10-12倍（V/W）。

步驟（1）所述超聲頻率為70-100KHz。

步驟（1）所述提取時間為60-100min。

步驟（2）所述氧化鋁為120目，氯仿-甲醇體積比為2:1，用量為柱體積的6倍。

步驟（3）所述制備型液相色譜的流動相為乙腈-0.2%乙二胺水溶液，體積比為33:67。

步驟（3）所述紫外檢測波長為208nm。

步驟（4）所述丙酮為90-100%的丙酮水溶液。

所述制備的防風草二內酯，在其口服配方中添加腸吸收促進劑，包含中鏈脂肪酸鹽、膽酸鹽、鵝去氧膽酸鹽、殼聚糖及其衍生物中的一種或幾種。

采用本法制備防風草二內酯，工藝簡便易操作，制備量大，產品得率高，而且低污染；添加腸吸收促進劑，有利于提高生物利用度。

下面將結合具體實施方式進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式

實施例1：

防風草二內酯的制備

取防風草葉1kg，粉碎成粗粉，從連續逆流超聲提取設備頭部進料口進料，從連續逆流超聲提取設備尾部溶劑加入口加入10倍90%%乙醇溶液，65℃下進行連續逆流超聲提取60min，超聲頻率為80KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，向浸膏中加氧化鋁（120目）拌勻、干燥后裝柱，用6倍柱體積的氯仿-甲醇（2:1）混合溶液洗脫，薄層檢測，收集防風草二內酯流分，濃縮干燥得到防風草二內酯粗品。以乙腈-0.2%乙二胺水溶液為流動相，體積比為33:67，色譜柱以C8鍵合相為填料，粒徑為10μm，柱長為15cm、直徑為4cm，將粗品加入流動相至剛好溶解，溶解后的溶液經0.45μm微濾膜過濾，得到樣品溶液，六通閥進樣，進樣體積為25ml，控制流速為50ml/min，紫外在線檢測，檢測波長為208nm，收集目標成分，減壓回收試劑得防風草二內酯粗晶，用丙酮重結晶，冷凍干燥得到高純度防風草二內酯結晶，經HPLC檢測，純度97.2%。

實施例2：

防風草二內酯的抗腫瘤應用

1、材料

動物：昆明種小鼠，雌雄各半性，體重20±2g，由南京中醫藥大學提供。

細胞株：KB口腔表皮樣癌細胞株（KB），由中國科學院上海藥物研究所提供。

2、方法