[發明專利]一種提取水牛果素A的方法

在審

• 申請號: 201410266205.4
• 申請日: 2014-06-16
• 公開（公告）號: CN104072546A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發明（設計）人: 劉東鋒;楊成東
• 申請（專利權）人: 南京澤朗醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07H15/203
• 分類號: C07H15/203;C07H1/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于中藥化學技術領域，涉及一種一種提取水牛果素A的方法。

背景技術

水牛果素A（Shephagenin?A），分子式為C₄₈H₃₂O₃₂，分子量為1120.75，結構式為：

水牛果素A是從胡頹子科(Elaeagnaceae)?銀水牛果?Shepherdia?argentea?Nutt.葉中分離得到一種活性化合物。藥理研究表明，水牛果素A具有抗HIV-1逆轉錄酶，IC50為0.049μM，強于陽性對照物(-)-epigallocatechin?gallate(IC50為0.25μM)。

現有技術中，尚未見工業化制備水牛果素A的生產工藝報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種提取水牛果素A的方法。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種提取水牛果素A的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）以銀水牛果的葉為原料，放入高速組織搗碎機，在轉速為18000rpm條件下保持3-5min后，過40目篩備用；

（2）原料按照料液比1:4-6（g/ml）的比例加入乙醇水溶液后，再加入0.3-0.5%的纖維素酶，在超聲功率500-700W、45-60℃條件下酶解60-90min，得到酶解原料；

（3）將酶解原料投入加入閃式提取器中，加入提取溶劑，進行閃式提取，過濾得到提取液，濃縮干燥得到粗提物；

（4）將所得粗提物用甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠柱層析純化，氯仿-甲醇溶劑系統梯度洗脫，收集水牛果素A流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶；

（5）將粗晶用乙酸乙酯重結晶得到水牛果素A白色結晶。

所述步驟（2）中乙醇水溶液體積百分比為70-80%。

所述步驟（2）中提取溶劑為70-85%的乙醇溶液。

所述步驟（3）中閃式提取電壓為150V，提取時間為3-5min。

所述步驟（4）中所述高壓硅膠柱層析，硅膠目數為200目，耐壓35MPa，柱內徑為250mm，層析柱徑高比為1：10。

所述步驟（4）中所述氯仿-甲醇的體積比為1:1-1:13。

本發明的有益效果是：本發明操作簡單，耗時短，得率高，易規模化生產；采用高壓層析柱，上樣量大，生產周期短，分離度好，產品純度高。

下面將結合具體實施方式進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式：

實施例1：

以銀水牛果的葉為原料，切成1cm左右段狀，放入高速組織搗碎機，在轉速為18000rpm條件下保持5min后，過40目篩備用，稱取1kg，按照料液比1:4（g/ml）的比例加入80%乙醇水溶液后，再加入0.5%的纖維素酶，在超聲功率700W、50℃條件下酶解70min，得到酶解原料，加入閃式提取器中，加入6L80%的乙醇溶液作為提取溶劑，提取電壓為150V，提取時間為3min，進行閃式提取2次，過濾得到提取液，提取液濃縮干燥后得到粗提物，用甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠（硅膠目數為200目）柱層析純化，耐壓35MPa，柱內徑為250mm，層析柱徑高比為1：10，氯仿-甲醇按體積比為1:1、1:6、1:13梯度洗脫，收集水牛果素A流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重結晶得到水牛果素A白色結晶，含量為95.8%。

實施例2：

以銀水牛果的葉為原料，切成1cm左右段狀，放入高速組織搗碎機，在轉速為18000rpm條件下保持3min后，過40目篩備用，稱取1kg，按照料液比1:6（g/ml）的比例加入70%乙醇水溶液后，再加入0.4%的纖維素酶，在超聲功率700W、45℃條件下酶解90min，得到酶解原料，加入閃式提取器中，加入4.5L75%的乙醇溶液作為提取溶劑，提取電壓為150V，提取時間為5min，進行閃式提取2次，過濾得到提取液，提取液濃縮干燥后得到粗提物，用甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠（硅膠目數為200目）柱層析純化，耐壓35MPa，柱內徑為250mm，層析柱徑高比為1：10，氯仿-甲醇按體積比為1:1、1:7、1:13梯度洗脫，收集水牛果素A流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重結晶得到水牛果素A白色結晶，含量為94.4%。

實施例3：