[發明專利]以甘蔗汁為原料用腸膜明串珠菌發酵產甘露醇的方法

有效

• 申請號: 201410254455.6
• 申請日: 2014-06-10
• 公開（公告）號: CN104017831A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 金紅星;成文玉;李海超
• 申請（專利權）人: 河北工業大學
• 主分類號: C12P7/18
• 分類號: C12P7/18;C12R1/01
• 代理公司: 天津翰林知識產權代理事務所(普通合伙) 12210
• 代理人: 胡安朋

1.以甘蔗汁為原料用腸膜明串珠菌發酵產甘露醇的方法，其特征在于步驟如下：

第一步，以甘蔗汁-紅糖為原料制備培養基：

（1.1）準備用具：

將夾有0.2μm濾膜的濾器A用牛皮紙包裝好，然后與封口的100mL三角瓶一起放入高壓滅菌鍋內，于121℃滅菌20分鐘，準備好滅菌的夾有0.2μm濾膜的濾器A和滅菌的100mL三角瓶；

（1.2）榨甘蔗汁：

稱取3350克甘蔗，去皮后切成條狀，放入果汁機中榨取甘蔗汁；

（1.3）甘蔗汁的離心與過濾：

取上一步（1.2）制得的1050mL甘蔗汁液用轉速為13000轉/分的離心機離心30分鐘，取得甘蔗汁上清液A?1010mL；再把甘蔗汁上清液A用夾有0.2μm濾膜的濾器B過濾而獲得甘蔗汁濾液B?1005mL；

（1.4）添加紅糖獲得甘蔗汁-紅糖濾液：

往上述甘蔗汁濾液B?1005mL中加入紅糖2.5克并攪拌使其完全溶解，從而獲得甘蔗汁-紅糖濾液C；

（1.5）冷滅菌：

在超凈工作臺的酒精燈附近將上述步驟（1.4）制得的甘蔗汁-紅糖濾液C用上述步驟（1.1）準備好的滅菌的夾有0.2μm濾膜的濾器A過濾，制備得到無菌的甘蔗汁-紅糖濾液D?1000mL，在上述步驟（1.1）準備好的滅菌的100mL三角瓶中加入剛制備得到的無菌的甘蔗汁-紅糖濾液D?40mL后封口，作為下一步的培養基待用；

第二步，用腸膜明串珠菌發酵產甘露醇：

（2.1）活化腸膜明串珠菌菌種：

將腸膜明串珠菌以1%接菌量加入到已經置于50mL的三角瓶內的10mL?MRS培養基中，振蕩培養12～16小時；

（2.2）接腸膜明串珠菌：

在超凈工作臺的酒精燈附近將上述步驟（2.1）活化好的腸膜明串珠菌菌種以1%接菌量加入到上述步驟（1.5）經冷滅菌制得的置于100mL三角瓶內的甘蔗汁-紅糖濾液D?40mL中；

（2.3）培養制得發酵液：

將上述步驟（2.2）接腸膜明串珠菌后的三角瓶置于搖床中，在30℃下以120轉/分的速度振蕩培養24小時，制得發酵液40mL；

（2.4）分離純化：

將上述步驟（2.3）培養制得的發酵液40mL用轉速為10000轉/分的離心機離心10分鐘，去除菌體沉淀得發酵上清液A?37mL；在發酵上清液A?37mL中加入等量體積的乙醇，用轉速為12000轉/分的離心機離心15分鐘，去除葡聚糖沉淀得發酵上清液B?74mL，將發酵上清液B?74mL在4℃結晶即制得甘露醇1.16克。