[發明專利]一種利用柳枝稷幼穗進行無性繁殖的方法

有效

• 申請號: 201410249960.1
• 申請日: 2014-06-06
• 公開（公告）號: CN104067934B
• 公開（公告）日: 2018-11-09
• 發明（設計）人: 奚亞軍;王勇鋒;李毛
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 西安睿通知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 61218
• 代理人: 惠文軒

本發明公開了一種利用柳枝稷幼穗進行無性繁殖的方法，在柳枝稷第4個節完全露出時，取柳枝稷幼穗作為誘導外植體；將外植體消毒后，在兩端各切下0.5cm，并縱向將外植體切為兩半，切面向下接種到誘導培養基上；30～40天后獲得穗芽，對獲得的穗芽進行繼代培養，進一步擴大穗芽的數量；將繼代后的穗芽從芽塊分離成單個個體種植到培養基質中，約7天后即可生根，發育成為新的植株，此時可將幼苗連同培養基質栽植于溫室或大田。本發明中的無性繁殖方法，以柳枝稷幼穗為外植體，通過誘導及繼代培養，能夠獲得大量基因型完全一致的后代。

技術領域

本發明屬于柳枝稷組織培養技術領域，涉及一種柳枝稷無性繁殖的方法。

背景技術

柳枝稷(英文名Switchgrass，拉丁名Panicum virgatum Linn)為禾本科黍屬多年生草本植物，原生于北美地區，具有栽培簡單、抗逆性強、生物學產量高等特點。20世紀80年代，柳枝稷被確定為模式生物能源植物，并于20世紀90年代被我國科研工作者引入國內。在化石燃料日益緊缺的今天，人們對柳枝稷的研究愈加重視，近幾年來，國際上公開發表的關于柳枝稷的科研論文每年都超過300篇。

柳枝稷為異花授粉植物，具有很強的自花不親和性，因此，有性繁殖獲得的后代個體基因型多數存在差異。與有性繁殖方式相比，無性繁殖是由植物營養器官直接發育成新個體的過程，整個過程不涉及染色體的分離和重組，所產生的后代與親本具有完全一致的基因型，在柳枝稷優良基因型保持及生物技術研究過程中具有重要的意義。

發明內容

本發明解決的問題在于提供一種直接將柳枝稷幼穗誘導成穗芽的方法，該方法涉及植物器官逆向發育過程，為柳枝稷無性繁殖提供一條新的途徑。

本發明是通過以下技術方案來實現：

一種利用柳枝稷幼穗進行無性繁殖的方法，包括以下操作：

1)待柳枝稷生長發育至第4個節完全露出、幼穗已形成時，從靠近地面處將柳枝稷分蘗剪下，從下向上剝去柳枝稷分蘗上的葉片至節間長度小于1cm時停止，距該節間上端莖節上下各1.2～1.5cm切下，獲得包含幼穗的外植體；

2)將外植體消毒并用無菌水漂洗；

3)無菌環境下，將外植體兩端各切去0.2～0.5cm，將外植體縱向切為兩半，切口向下接種到誘導培養基上；接種后置于恒溫光照培養箱中，培養30～40天至穗芽形成；

所述的誘導培養基是以MS為基礎培養基，并添加6-BA、瓊脂粉和蔗糖；

4)將形成的穗芽沿基部2～3mm處切除，并再次接種到誘導培養基上，待新生芽生長至1.2～1.5cm，重復繼代培養3～4次，獲得擴繁后的穗芽；

5)在不損害生長點的情況下，將穗芽從基部自芽塊上拆分下來，將穗芽單獨直接扦插到培養基質中，培養7天后，待單獨的穗芽生根并發育成獨立的幼苗，將幼苗連同培養基質栽植于溫室或大田。

所述的外植體中包含有2cm左右長度的幼穗，具有正常花原基組織。

所述的外植體的消毒處理為：先用體積分數為70％的酒精消毒1～2min，然后用體積分數5～8％的次氯酸鈉溶液消毒2～3min；

消毒完成后并用滅菌水漂洗3次。

所述的誘導培養基的成分為：MS基礎培養基4.43g/L，3mmol/L的6-BA、7.5g/L的瓊脂粉和30g/L的蔗糖。

所述在恒溫光照培養箱進行培養時，其培養溫度為20～25℃、每天光照20h、黑夜4h。

所述，在進行繼代培養時，采用上次培養的新生芽進行接種，接種時新生芽的長度為1.0cm。