[發明專利]棲土曲霉蛋白酶在制備傷口清創、促進傷口愈合的藥物中的應用

無效

• 申請號: 201410243456.0
• 申請日: 2014-06-03
• 公開（公告）號: CN103977398A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: 陳宏林;朱昌來
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: A61K38/48
• 分類號: A61K38/48;A61P17/02;C12N9/62;C12R1/66
• 代理公司: 南通市永通專利事務所 32100
• 代理人: 葛雷

1.一種棲土曲霉蛋白酶在制備傷口清創、促進傷口愈合的藥物中的應用。

2.根據權利要求1所述的棲土曲霉蛋白酶在制備傷口清創、促進傷口愈合的藥物中的應用，其特征是：所述傷口為燒傷傷口、壓瘡傷口、慢性感染傷口或糖尿病足傷口。

3.?根據權利要求1或2所述的棲土曲霉蛋白酶在制備傷口清創、促進傷口愈合的藥物中的應用，其特征是：所述棲土曲霉蛋白酶由下列步驟制得：

（1）培養基的制備

發酵培養基配比為：麩皮3%、米糠1%、玉米粉1%、KH₂PO_4?0.4%，加水至100%，并于120℃下高溫滅菌30分鐘；

（2）粗酶液的制備液

將棲土曲霉3.942菌種按培養基8%的重量接種后，在250r/min振蕩器中30℃下培養72小時；終止培養后，將發酵培養物于離心機中3000?r/min離心10分鐘，取上清液即為粗酶液；

（3）棲土曲霉蛋白酶的分離

粗酶液過濾，濾液調節pH至7.0，加入20％濃度的單寧酸，邊加邊攪拌；單寧酸用量為粗酶液重量的1％；待沉淀完全后離心，收集沉淀；沉淀用pH?7.2、0.02M磷酸緩沖液溶解；使用聚乙二醇洗脫單寧酸，在攪拌下加入10％濃度的PEG，使PEG與單寧酸之比值達到3:1ml/g；離心，收集上清液，加人2倍重量的冷丙酮，靜置過夜，離心，收集沉淀；沉淀再浸泡于冷丙酮，靜置過夜，然后過濾，沉淀用乙醚再洗滌一次，干燥即得棲土曲霉蛋白酶丙酮粉粗制劑；

（4）棲土曲霉蛋白酶的純化

上述丙酮粉粗酶用pH8.4、0.05M?Tris-HCL緩沖液溶解，上DEAE-Sephadex?A-25柱，然后用平衡緩沖液洗滌；層析共分離出7個峰，酶活力存在于P2峰內；收集P2峰，對水于低溫下透析至無鹽止，再用PEG脫水濃縮后，冷凍干燥。