[發(fā)明專利]一種單基因缺失粗糙型布魯氏菌及其疫苗的生產方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410241278.8
• 申請日: 2014-06-03
• 公開（公告）號: CN104004697A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發(fā)明（設計）人: 丁家波;王楠;李慧嬌;王忠田;王芳;蔣卉;顧進華;寧宜寶;張廣川;毛開榮;戴志紅;李寧;印春生
• 申請（專利權）人: 中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;A61K39/10;A61P31/04;C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 鄭明

1.一種單基因缺失粗糙型布魯氏菌的疫苗生產菌株，其特征在于采用非抗性無痕缺失技術，缺失了布魯氏菌2308株wboA基因1-897bp之間的序列，構建了能夠不干擾布病臨床診斷的粗糙型重組布魯氏菌r2308-ΔWboA株，用該菌制備的布魯氏菌病活疫苗免疫動物后，其血清可用常規(guī)的凝集試驗與自然感染相區(qū)分，本牛種布魯氏菌(Brucella?abortus)r2308-ΔWboA株已于2014年05月20日送交北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所中國微生物保藏委員會普通微生物保藏中心，保藏號為：CGMCC?No.8885。

2.一種布魯氏菌病疫苗，其特征在于該疫苗含有活的布魯氏菌CGMCC?No.8885株和獸用生物制品常用的凍干保護劑。

3.如權利要求2所述一種布魯氏菌病疫苗的制備方法，其特征在于用胰大豆肉湯作為重組菌的培養(yǎng)基，滅菌后按培養(yǎng)基量的按1％～2％接入布魯氏菌CGMCC?No.8885株種子菌液，37℃，按常規(guī)方法發(fā)酵培養(yǎng)28～38h，加入獸用生物制品常用的凍干保護劑，充分混勻、分裝疫苗瓶中后經冷凍真空干燥，即成為單基因缺失粗糙型r2308-ΔWboA株布魯氏菌病疫苗。

4.一種基因缺失粗糙型布魯氏菌的鑒別診斷，其特征在于用如序列7和序列8所述序列的一對特異性引物，通過PCR方法可以與非重組的原始菌相區(qū)分。