[發(fā)明專利]用于檢測馬傳染性貧血病毒p26蛋白的試劑盒及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410239152.7
• 申請日: 2014-05-30
• 公開（公告）號: CN104020294A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王曉鈞;胡哲;林躍智;周建華
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

1.一種用于檢測馬傳染性貧血病毒p26蛋白的試劑盒，其特征在于所述試劑盒包含由保藏號為CGMCC?NO.9106以及保藏號為CGMCC?NO.9107的雜交瘤細(xì)胞株分泌產(chǎn)生的單克隆抗體，任選其中一種單克隆抗體是用辣根過氧化物酶或異硫氰酸熒光素或生物素標(biāo)記的。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于保藏號CGMCC?NO.9106的雜交瘤細(xì)胞株分泌產(chǎn)生的單克隆抗體是用辣根過氧化物酶或異硫氰酸熒光素或生物素標(biāo)記的。

3.如權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于保藏號CGMCC?NO.9106的雜交瘤細(xì)胞株分泌產(chǎn)生的單克隆抗體是用辣根過氧化物酶標(biāo)記的。

4.如權(quán)利要求1-3任一項所述的試劑盒，其特征在于還進(jìn)一步包含陽性參考品、稀釋液、封閉液、洗滌液、顯色液和終止液。

5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于所述的陽性參考品為純化的馬傳染性貧血病毒p26蛋白，所述的稀釋液為含有10％小牛血清以及0.1％TRITON?X-100的磷酸鹽緩沖液，所述的封閉液為含有5％小牛血清的磷酸鹽緩沖液，所述的洗滌液為PBST緩沖液，所述的顯色液的TMB?A+B雙組分顯色液，所述的終止液為2M?H₂SO₄。

6.如權(quán)利要求1-5任一項所述的試劑盒，其特征在于是通過以下步驟檢測馬傳染性貧血病毒p26蛋白：

(1)用稀釋液將保藏號為CGMCC?NO.9107的雜交瘤細(xì)胞株分泌產(chǎn)生的單克隆抗體稀釋至1μg/ml，加至96孔板，每孔100μl，4℃過夜，所述的稀釋液為含有10％小牛血清以及0.1％TRITON?X-100的磷酸鹽緩沖液；

(2)PBST緩沖液洗4次，前3次1min，第4次5min；

(3)用含5％小牛血清的磷酸鹽緩沖液封閉，每孔200μl，37℃封閉1h；

(4)PBST緩沖液洗4次，前3次1min，第4次5min；

(5)加入稀釋后的待檢測抗原，每孔100μl，37℃孵育2h；

(6)PBST緩沖液洗4次，前3次1min，第4次5min；

(7)用稀釋液稀釋HRP標(biāo)記的保藏號CGMCC?NO.9106的雜交瘤細(xì)胞株分泌產(chǎn)生的單克隆抗體，加入稀釋后的酶標(biāo)抗體，每孔100μl，37℃孵育2h；

(8)PBST緩沖液洗4次，前3次1min，第4次5min；

(9)加入TMB?A+B雙組分顯色液，每孔100μl，室溫避光靜止10min；

(10)加入2M?H₂SO₄終止反應(yīng)，立即于OD_450nm測值。

7.權(quán)利要求1-6任一項所述的試劑盒在制備檢測馬傳染性貧血病毒p26蛋白的試劑中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求1-6任一項所述的試劑盒在制備檢測馬傳染性貧血病毒的試劑中的應(yīng)用。