[發(fā)明專利]用于特異性蘑菇類過敏原IgE篩查的試紙條及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410232543.6
• 申請日: 2014-05-28
• 公開（公告）號: CN103995135A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發(fā)明（設計）人: 蔣琳
• 申請（專利權(quán)）人: 中生北控生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種用于特異性蘑菇類過敏原IgE篩查的試紙條，其特征在于，所述試紙條包被有膠體金標記的蘑菇類抗原。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述試紙條為包被有膠體金標記的蘑菇類抗原的硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述試紙條的pH值為8.5-10，膠體金顆粒與蘑菇類抗原之間的摩爾比為5-20:1。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的試紙條，其特征在于，蘑菇類包括但不限于香菇、猴頭、草菇、蘑菇、口蘑、木耳、銀耳、竹蓀、松口蘑、牛肝菌。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試紙條，其特征在于，所述蘑菇類抗原為香菇抗原；所述香菇抗原的制備方法為：將香菇切成碎末，取50g加入200mL乙醇分析純進行脫脂處理，重復脫脂5次以上，每次脫脂結(jié)束后進行離心，離心后的物質(zhì)置于通風櫥中，將殘余的乙醇揮發(fā)完全，即得香菇抗原。

6.權(quán)利要求1-5任一項所述試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)蘑菇類抗原溶液的制備：將待標記的蘑菇類抗原溶解在0.9％pH7.0的NaCl溶液中，使其終濃度為50-500μg/ml，即得蘑菇類抗原溶液；

2)膠體金溶液的制備：用0.1M?K₂CO₃溶液和0.1M?HCl調(diào)0.01％HAuCl₄膠體金溶液的pH值至8.5-10，使膠體金的粒徑達到40-60nm，濃度達到0.5-2％，即得膠體金溶液；

3)膠體金與蘑菇類抗原的結(jié)合：用0.1M?K₂CO₃溶液調(diào)步驟1)的抗原溶液的pH值至8.5-10，邊攪拌邊向其中加入步驟2)的膠體金溶液，抗原溶液與膠體金溶液的體積比為1-10:100，同時加入穩(wěn)定劑以防止蘑菇類抗原與膠體金顆粒聚合沉淀，即得膠體金-蘑菇類抗原結(jié)合物；所述穩(wěn)定劑為1％BSA和0.1％分子量20KD的聚乙二醇；

4)膠體金標記的蘑菇類抗原的純化：將步驟3)中制備的膠體金-蘑菇類抗原結(jié)合物經(jīng)1500r/min離心20min；收集沉淀溶于穩(wěn)定劑中，使其濃度達到5-30％；然后加至Sephacryl?S-400層析柱上進行純化，將純化的膠體金標記的蘑菇類抗原溶液過濾除菌，4℃保存；所述穩(wěn)定劑為1％BSA和0.1％分子量20KD的聚乙二醇溶液；

5)試紙條的包被：將步驟4)中制備的膠體金標記的蘑菇類抗原溶液噴線于試紙條上，干燥后即得用于特異性蘑菇類過敏原IgE篩查的試紙條成品。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟4)中加樣量為Sephacryl?S-400層析柱體積的1/10，以穩(wěn)定劑作為洗脫液，流速為5-10ml/h；所述穩(wěn)定劑為1％BSA和0.1％分子量20KD的聚乙二醇溶液。