[發明專利]甲酸切割位點肽及其相關生物材料與它們在生產降鈣素中的應用

有效

• 申請號: 201410231041.1
• 申請日: 2014-05-28
• 公開（公告）號: CN105218633B
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 劉昱輝;張華光;李梅
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K19/00;C12N15/11;C12N15/62;C07K1/12;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/20;C07K14/585
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的肽。

2.一種融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白是降鈣素融合蛋白G-sCT-SO，所述降鈣素融合蛋白G-sCT-SO是將糖蛋白膜外區和降鈣素連接形成的融合蛋白G-sCT與芝麻油體蛋白連接形成的蛋白質；所述融合蛋白G-sCT是由甲酸切割位點肽將所述糖蛋白膜外區和所述降鈣素連接形成的融合蛋白；所述甲酸切割位點肽的氨基酸序列是SEQ ID No.2。

3.根據權利要求2所述的融合蛋白，其特征在于：所述降鈣素融合蛋白G-sCT-SO的氨基酸序列是SEQ ID No.4。

4.與權利要求1所述肽相關的生物材料、或與權利要求2或3所述融合蛋白相關的生物材料：

與權利要求1所述肽相關的生物材料為B1)- B5)中的任一種：

B1）編碼權利要求1所述肽的核酸分子；

B2）含有B1）所述核酸分子的表達盒；

B3）含有B1）所述核酸分子的重組載體；

B4）含有B1）所述核酸分子的重組微生物；

B5）含有B1）所述核酸分子的轉基因動物細胞系；

與權利要求2或3所述融合蛋白相關的生物材料為C1)- C5)中的任一種：

C1）編碼權利要求2或3所述融合蛋白的核酸分子；

C2）含有C1）所述核酸分子的表達盒；

C3）含有C1）所述核酸分子的重組載體；

C4）含有C1）所述核酸分子的重組微生物；

C5）含有C1）所述核酸分子的轉基因動物細胞系。

5.制備權利要求2或3所述融合蛋白的方法，包括將權利要求2或3所述的融合蛋白的編碼基因在生物細胞中進行表達得到權利要求2或3所述融合蛋白的步驟；所述生物細胞為微生物細胞、植物細胞或非人動物細胞。

6.由權利要求2或3所述融合蛋白制備目的蛋白的方法，包括對權利要求2或3所述融合蛋白進行甲酸切割得到所述目的蛋白；所述甲酸切割條件是甲酸的濃度為40%（體積百分比），切割溫度為43℃，切割時間為2.5 h。

7.一種培育含有降鈣素融合蛋白轉基因油菜的方法，所述方法包括向受體油菜中導入降鈣素融合蛋白G-sCT-SO的編碼基因，得到含有降鈣素融合蛋白的轉基因油菜；

所述降鈣素融合蛋白G-sCT-SO是將糖蛋白膜外區和降鈣素連接形成的融合蛋白G-sCT與芝麻油體蛋白連接形成的蛋白質；所述融合蛋白G-sCT是由甲酸切割位點肽將所述糖蛋白膜外區和所述降鈣素連接形成的融合蛋白；所述甲酸切割位點肽的氨基酸序列是SEQ IDNo.2。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述降鈣素融合蛋白G-sCT-SO的氨基酸序列是SEQ ID No.4；所述降鈣素的氨基酸序列是SEQ ID No.4的第215-247位。

9.制備降鈣素的方法，包括從權利要求7或8所述的培育含有降鈣素融合蛋白轉基因油菜的方法得到的含有降鈣素融合蛋白的轉基因油菜分離所述轉基因油菜的油體，對所述油體進行甲酸切割得到所述降鈣素；所述甲酸切割條件是甲酸的濃度為40%（體積百分比），切割溫度為43℃，切割時間為2.5 h。