[發明專利]固相萃取液質聯用法測定葡萄酒中甲霜靈、多菌靈的方法

有效

• 申請號: 201410228552.8
• 申請日: 2014-05-27
• 公開（公告）號: CN105223278B
• 公開（公告）日: 2017-09-19
• 發明（設計）人: 陳軍;樊繼鵬;謝鑫陟;徐罕琦
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國蘇州出入境檢驗檢疫局
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/08
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司32103
• 代理人: 范晴

技術領域

本發明涉及產品安全與檢測技術領域，具體涉及一種固相萃取液質聯用法檢測葡萄酒中農殘的方法。

背景技術

葡萄酒是由新鮮葡萄或葡萄汁發酵后制得，葡萄酒中富含多種營養物，如氨基酸、維生素、β-谷甾醇、多酚和礦質元素等，適當飲用葡萄酒可以預防疾病，增強人體健康。然而在葡萄的病蟲害防治過程中，經常噴施殺蟲劑、殺菌劑和除草劑等農藥。一般而言，農藥的殘效期比較長，且伴有一定的毒性，這樣殘留的農藥會通過食物鏈最終進入人體，給人體健康帶來潛在的危害。

隨著檢測技術及食品質量安全要求的提高，近兩年對葡萄酒中農殘的報道日益增多。而葡萄在病蟲防害中常用到多菌靈、甲霜靈等農藥，其中，多菌靈(Carbendazim，MBC)，化學名稱為N-(2-苯并咪唑基)氨基甲酸酯，是一種廣譜、內吸附性殺菌劑，可以有效預防葡萄白腐病、黑痘病、炭疽病等。甲霜靈(metalaxyl)，屬苯基酰胺類高效低毒內吸性殺菌劑，化學名稱：D,L-N-(2,6二甲基苯基)-N-(2'-甲氧基乙基)氨基丙酸甲酯，主要應用于葡萄酒霜霉病菌、疫霉病菌和腐病菌的防治，但這兩種農藥對人體均有致癌或導致遺傳性疾病風險，所以研究葡萄酒中甲霜靈、多菌靈可行性檢測方法，對維護國內外葡萄酒行業規范及健康發展具有現實意義。

目前對于葡萄酒中農殘—甲霜靈、多菌靈等農殘項目檢測沒有具體的國家檢測標準或相關專利，文獻中報道主要涉及氣相色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法/氣質聯用法、液相色譜/質譜聯用分析法等，前處理方法主要采用液/液萃取(Liquid/liquid extraction,LLE)、加速溶劑萃取(Accelerate solvent extraction,ASE)、固相微萃取(Solid phase microextration,SPME)及固相萃取柱萃取(Solidphase extration,SPE)等，但葡萄酒樣品成分雜、基質干擾大，若前處理不當，極易影響檢測結果。

發明內容

本發明所要解決的問題是提供固相萃取液質聯用法測定葡萄酒中甲霜靈、多菌靈含量的定量方法，其分析流程包括樣品的預處理方法和目標化合物的檢測方法，適用于葡萄酒中相關農殘的檢測，其結果可為葡萄酒中多菌靈、甲霜靈的安全限量控制提供參考。

為了解決前述的技術問題，本發明提供技術方案是：

一種固相萃取液質聯用法測定葡萄酒中甲霜靈、多菌靈的方法，包括如下步驟：

(1)繪制多菌靈、甲霜靈的標準曲線

A.分別以多菌靈、甲霜靈標準溶液制成梯度標準系列溶液，

B.調節步驟A中各個溶液pH值，用乙腈進行液液萃取，

C.加入氯化鈉，待溶液鹽析分層后，用氨基固相萃取柱對乙腈層進行萃取，利用洗脫液對固相萃取柱進行洗脫，收集洗脫液，轉入旋轉蒸發儀濃縮后用氮氣吹干，

D.通過乙腈水溶液回溶后，注入液質聯用儀進行分析，獲得葡萄酒中甲霜靈、多菌靈的含量，

E.將目標化合物的濃度對色譜峰面積對應，即得到校準后的標準曲線；

(2)以待測葡萄酒樣品為試樣，采用步驟(1)中A-E的方法，可以得到待測葡萄酒樣品中的樣品測定值，將該測定值對照標準曲線后，可計算得到葡萄酒中多菌靈及甲霜靈含量。

優選的技術方案是：步驟(1)B中，采用0.5mol/L氫氧化鈉調節待測樣品酸堿度：調節pH＝8。

優選的技術方案是：步驟(1)C中，采用氨基固相萃取柱萃取，其洗脫條件為：甲苯：乙腈＝3:1，洗脫劑用量15mL，分三次淋洗。

優選的技術方案是：步驟(1)D中，采用80％乙腈水溶液進行回溶。

優選的技術方案是：步驟(1)D中，測定條件為：色譜柱：Inertsil C8，5μm，150mm*2.1(內徑)或相當者。流動相為0.3％乙酸水溶液(A)和0.3％乙酸的乙腈溶液(B)梯度洗脫，柱溫：30℃。

優選的技術方案是：步驟(1)D中，洗脫液經氮氣吹干后，溶解在1mL、80％乙腈水溶液中，取20μL溶液進液質聯用儀進行分析。