[發(fā)明專利]一種阿尼芬凈的純化方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410221605.3
• 申請日: 2014-05-23
• 公開（公告）號: CN103965298A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張福利;倪國偉;裘鵬程;成蝶;陽凱;柴健;侯普樂;楊志清
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江海正藥業(yè)股份有限公司;上海醫(yī)藥工業(yè)研究院
• 主分類號: C07K7/56
• 分類號: C07K7/56;C07K1/22
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，涉及一種棘白菌素類抗真菌化合物的純化方法。具體來說，本發(fā)明涉及抗真菌化合物阿尼芬凈通過大孔吸附樹脂進(jìn)行純化的方法。

發(fā)明背景

近年來，隨著腫瘤化療、器官移植、艾滋病等發(fā)病率的增加，深部真菌感染的發(fā)生率及由此引起的死亡率持續(xù)上升，已經(jīng)成為臨床較為棘手的問題之一。棘白菌素類化合物具有較好的抗真菌活性，包括棘白菌素B、棘白菌素C、肺念菌素A0、肺念菌素B0和WF11899等。該類化合物可進(jìn)一步修飾為半合成藥物，依次上市的有米卡芬凈、卡泊芬凈和阿尼芬凈。上述半合成藥物的起始原料均由微生物發(fā)酵獲得，含有大量的結(jié)構(gòu)類似的副產(chǎn)物，給后續(xù)終產(chǎn)物的純化帶來了極大的困難。

阿尼芬凈屬于棘白菌素類抗真菌藥物，CAS號為166663-25-8，分子量為1140.24，結(jié)構(gòu)式如下式Ⅰ所示，2006年首次在美國上市，藥用劑型為注射劑，主要應(yīng)用于深部真菌感染，特別是念珠菌感染的治療。

在CN93103587和CN00805697中公布了阿尼芬凈的制備方法，以發(fā)酵產(chǎn)物為起始原料，通過脫酰化酶處理得母環(huán)，后與側(cè)鏈戊氧三聯(lián)苯甲酰基連接制得阿尼芬凈粗品，再經(jīng)液相制備柱純化獲得阿尼芬凈純品，這兩個申請中未公開制備柱的填料和洗脫溶液，具體的純化方案未知，并且液相制備柱的純化方法在工業(yè)上放大，目前還存在一定的難度。

Timothy N,John V等(commercialization and late-stage development of semi-synthetic antifungal API:anidulafungin/D-Fructose(Eraxis)，organic process research and development12,447.2008)公布了制備阿尼芬凈-果糖共晶復(fù)合物的方法，其中母環(huán)與側(cè)鏈連接制得粗品后，直接與D-果糖形成共晶復(fù)合物，該文獻(xiàn)中沒有報道終產(chǎn)物的純度和關(guān)鍵的純化技術(shù)方案。

根據(jù)CN00805697中公開的方法可制得純度為97％的阿尼芬凈粗品，而作為藥物其對純度和雜質(zhì)都有較高的要求，以保證藥物的有效性和安全性。阿尼芬凈作為半合成藥物，起始原料中含有的結(jié)構(gòu)類似的雜質(zhì)以及自身分子結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定性，決定了其相關(guān)雜質(zhì)的控制是純化技術(shù)方案的關(guān)鍵點(diǎn)，在CN201310146413.6中公開了一種用硅膠柱層析純化阿尼芬凈粗品的方法，該方法可將阿尼芬凈的純度提高至98％以上，而在該公開文本中未提及純化前后雜質(zhì)含量信息，然而對于藥物而言其API中雜質(zhì)含量的控制是影響藥物藥效與安全性的重要影響因素之一。在現(xiàn)有技術(shù)中關(guān)于阿尼芬凈中雜質(zhì)含量的控制方法報道很少，因此一種新的阿尼芬凈的純化方法亟需開發(fā)以滿足原料藥的工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種阿尼分凈的純化方法，通過使用大孔吸附樹脂，實(shí)現(xiàn)阿尼芬凈與關(guān)鍵雜質(zhì)的有效分離，包括以下步驟：

(a)取阿尼芬凈粗品，上樣于大孔吸附樹脂；

(b)用酸性或中性水溶液洗滌樹脂柱，再用體積百分比為0％-50％有機(jī)溶劑的酸性水溶液洗滌樹脂柱；

(c)用體積百分比為40％-80％有機(jī)溶劑的酸性水溶液洗脫吸附于樹脂上的阿尼芬凈，收集洗脫液；

(d)合并收集得到的洗脫液，分離得到阿尼芬凈。

其中，步驟(a)包括將阿尼芬凈粗品溶解于有機(jī)溶劑的水溶液中，所述有機(jī)溶劑的水溶液的體積百分比為50％-60％，有機(jī)溶劑可選自甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈或丙酮中一種或它們的任意混合。將上述溶液，上樣于濕法或干法裝柱的大孔吸附樹脂柱內(nèi)，進(jìn)行動態(tài)吸附(動態(tài)吸附具體指上樣的同時保持柱下端有液體緩慢的流出)，吸附過程中保持液體流速在2d/s(d/s表示滴/秒)。其中，所述大孔吸附樹脂的類型為聚苯乙烯類樹脂，優(yōu)選非極性或弱極性的聚苯乙烯類樹脂，具體優(yōu)選為H-60、HP20、HP20ss、HZ20ss、XAD-1600、XAD-4，更優(yōu)選H-60、HP20ss、HZ20ss，非限制性的優(yōu)選孔徑為75-300μm。

其中，洗滌步驟(b)包括吸附完畢后，先用酸性或中性水溶液洗滌樹脂柱，再用體積百分比為0％-50％有機(jī)溶劑的酸性水溶液進(jìn)行洗滌，優(yōu)選用體積百分比為10％-45％有機(jī)溶劑的酸性水溶液進(jìn)行洗滌，以除去大極性的雜質(zhì)。所述酸性水溶液和有機(jī)溶劑的酸性水溶液的PH為2-6，優(yōu)選2.5-4.5，更優(yōu)選3.0-3.5；有機(jī)溶劑的酸性水溶液的使用量約2BV(BV代表柱體積的意思)，洗滌液的流速為1BV/h。