[發明專利]一種輔助診斷2型糖尿病的檢測試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 201410213044.2
• 申請日: 2014-05-20
• 公開（公告）號: CN104178561A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發明（設計）人: 段世偉;湯琳琳;麥一峰;葉孟
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 寧波市天晟知識產權代理有限公司 33219
• 代理人: 張文忠

技術領域

本發明涉及糖尿病的輔助診斷技術領域，特別涉及一種輔助診斷2型糖尿病的檢測試劑盒及其使用方法。?

背景技術

糖尿病是一種常見的內分泌代謝性疾病，是由于血中胰島素絕對或相對不足，導致血糖過高，出現糖尿，進而引起脂肪和蛋白質代謝紊亂，臨床上可出現多尿、煩渴、多飲、多食，消瘦等表現，重者容易發生酮癥酸中毒等急性并發癥或血管、神經等慢性并發癥。糖尿病的患病率隨著生活條件的改善生活水平提高都呈逐漸增長的趨勢。據統計，目前中國糖尿病患病人數接近一億，患病率高達9.7％。糖尿病不是單一疾病，是由遺傳及環境因素在內的多種因素共同作用的結果。其中2型糖尿病發病人數約占糖尿病總發病人數的97％。2型糖尿病過去主要在超過40歲的成年人中發病，而現在2型糖尿病的發病正趨向低齡化。?

目前國內外對2型糖尿病機制的研究也越來越多。單核苷酸多態性(SNP)是指基因組DNA中某一特定核苷酸位置上發生轉換、顛換、插入或缺失等變化，是第三代分子標記。據估計，大約有10億個SNP分子標記將被用于基因功能及與疾病的相關性的關聯研究。而關于2型糖尿病分子機制CpG-SNP方面的研究甚少。CpG-SNP是指可以發生CG突變的SNP位點。已有相關研究報道表明2型糖尿病的發生與CpG-SNP有關，主要是SNP的突變通過對CpG位點的DNA甲基化影響而干擾基因功能的表達。一些CpG位點的引入或消除可能是2型糖尿病的發生密切相關。胰島素信號通路是與2型糖尿病發生密切相關的一條通路。?

PDPK1、GCK、PIK3R2、MAPK9、CBLC、MKNK2、FLOT2、TRIP10、KRAS屬于胰島素通路中的一部分基因。PDPK1主要編碼3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1(PDK1)蛋白，而PDPK1蛋白可以調節AGC家族中部分重要的蛋白激酶，包括蛋白激酶、血清和糖皮質激素誘導激酶；GCK編碼葡萄糖激酶，而葡萄糖激酶是促進葡萄糖磷酸化形成葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的關鍵酶；PIK3是PI3K/AKT通路中的一個重要基因，PI3K/AKT通路參與體內血糖穩態的調節；MAPK9編碼的JNK2蛋白與胰島beta細胞的破壞有關，也參與調節Th1/Th2免疫細胞；CBLC編碼的蛋白屬于Cb1家族，也參與了氰鈷胺素細胞內代謝，它與糖尿病酮癥酸中毒相關；MKNK2參與了胰島素信號通路對胰島素信號的調節，它的過度表達會抑制胰島素抵抗；FLOT2編碼的蛋白與細胞內小泡運輸和信號轉導有關；TRIP10可以?通過PI3K/AKT通路促進糖誘導的間質上皮轉化；KRAS編碼的蛋白屬于GTP酶家族中的一員，GTP酶參與了糖代謝。?

但目前，國內外還沒有公開任何用于檢測該胰島素通路PDPK1基因rs76318740單核苷酸多態性、GCK基因rs12702070單核苷酸多態性、PIK3R2基因rs3736328單核苷酸多態性、MAPK9基因rs1363513單核苷酸多態性、CBLC基因rs2965143單核苷酸多態性、MKNK2基因rs3810412單核苷酸多態性、FLOT2基因rs4795473單核苷酸多態性、TRIP10基因rs340141單核苷酸多態性、KRAS基因rs7311692單核苷酸多態性與2型糖尿病相關程度的試劑盒的相關研究報道。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的現狀，提供檢測方便、檢測準確率高的一種輔助診斷2型糖尿病的檢測試劑盒；通過基因引物對樣品DNA進行PCR擴增，并建立熔解曲線與標準熔解曲線相比較得出結論，其檢測方法簡單、高效。?

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：?

一種輔助診斷2型糖尿病的檢測試劑盒，所述的檢測試劑盒包含用于檢測PDPK1基因、GCK基因、PIK3R2基因、MAPK9基因、CBLC基因、MKNK2基因、FLOT2基因、TRIP10基因及KRAS基因單核苷酸多態性的引物，所述的單核苷酸多態性分別為rs76318740、rs12702070、rs3736328、rs1363513、rs2965143、rs3810412、rs4795473、rs340141及rs7311692，所述的引物包括：?

PDPK1基因特異性上游引物一：?

5’-gcgggcagggcggcCAGCTGCCCCTCTCTCCCc-3’；?

PDPK1基因特異性上游引物二：5’-gattaccg?CAGCTGCCCCTCTCTCCCt-3’；?

PDPK1基因下游引物：5’-AGAAAGCATCTGAGCAGGCACCAG-3’；?