[發(fā)明專利]一種固定化灰色鏈霉菌細(xì)胞高效轉(zhuǎn)化制備紫堇達(dá)明的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410209741.0
• 申請(qǐng)日: 2014-05-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103952449A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉吉華;索成林;余伯陽(yáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P17/18
• 分類號(hào): C12P17/18;C12R1/545
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種固定化灰色鏈霉菌細(xì)胞高效轉(zhuǎn)化制備紫堇達(dá)明的方法，其特征在于：用固定化灰色鏈霉菌(Streptomyces?griseus)ATCC-13273細(xì)胞轉(zhuǎn)化四氫巴馬汀制備紫堇達(dá)明，制備過(guò)程包括以下工藝步驟：

(1)灰色鏈霉菌(Streptomyces?griseus)ATCC-13273種子液的培養(yǎng)；

(2)聚氨酯泡沫載體的預(yù)處理；

(3)灰色鏈霉菌細(xì)胞的培養(yǎng)與固定化；

(4)用固定化灰色鏈霉菌細(xì)胞轉(zhuǎn)化四氫巴馬汀制備紫堇達(dá)明。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種固定化灰色鏈霉菌細(xì)胞高效轉(zhuǎn)化制備紫堇達(dá)明的方法，其特征在于：所述的(1)步驟中的種子液培養(yǎng)方法為：采用灰色鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌后接種來(lái)自于斜面培養(yǎng)的灰色鏈霉菌(Streptomyces?griseus)ATCC-13273，于25-28℃、180rpm搖床培養(yǎng)24-48小時(shí)，作為種子液備用；其中，灰色鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：3％玉米粉，0.76％豆粕，0.5％酵母粉，0.5％K₂HPO₄，0.12％葡萄糖，0.5％NaCl，0.01％MgSO₄7H₂O，初始pH為6.0-6.5。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種固定化灰色鏈霉菌細(xì)胞高效轉(zhuǎn)化制備紫堇達(dá)明的方法，其特征在于：所述的(2)步驟中的聚氨酯泡沫載體的預(yù)處理方法為：將聚氨酯泡沫裁剪成邊長(zhǎng)為4-10mm的立方體，以5％鹽酸溶液浸泡24h，蒸餾水反復(fù)洗滌至中性，然后以5％的氫氧化鈉溶液浸泡24h，蒸餾水反復(fù)洗滌至中性，取出后干燥備用。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種固定化灰色鏈霉菌細(xì)胞高效轉(zhuǎn)化制備紫堇達(dá)明的方法，其特征在于：所述的(3)步驟中的灰色鏈霉菌細(xì)胞的培養(yǎng)與固定化工藝為：取250mL三角瓶加入40mL灰色鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基和0.2-0.6g/L預(yù)處理后的聚氨酯泡沫，接入由步驟(1)得到的灰色鏈霉菌種子液，置于180rpm、28℃搖床中培養(yǎng)24-48小時(shí)，培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞吸附于聚氨酯泡沫空隙內(nèi)生長(zhǎng)，培養(yǎng)及固定化結(jié)束后，取出用生理鹽水漂洗3次，得到固定化灰色鏈霉菌，4℃保藏備用。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種固定化灰色鏈霉菌細(xì)胞高效轉(zhuǎn)化制備紫堇達(dá)明的方法，其特征在于：所述的(4)步驟中的用固定化灰色鏈霉菌細(xì)胞轉(zhuǎn)化四氫巴馬汀制備紫堇達(dá)明的搖瓶轉(zhuǎn)化工藝為：取250mL三角瓶加入40mL固定化灰色鏈霉菌細(xì)胞轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基、0.2-0.8g/L固定化細(xì)胞以及轉(zhuǎn)化底物四氫巴馬汀，120-180rpm、25-28℃搖床中培養(yǎng)轉(zhuǎn)化24-48h，轉(zhuǎn)化發(fā)酵液用于紫堇達(dá)明的分離制備，固定化細(xì)胞按上述相同條件重復(fù)用于轉(zhuǎn)化制備紫堇達(dá)明。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種固定化灰色鏈霉菌細(xì)胞高效轉(zhuǎn)化制備紫堇達(dá)明的方法，其特征在于：所述的(4)步驟中的用固定化灰色鏈霉菌細(xì)胞轉(zhuǎn)化四氫巴馬汀制備紫堇達(dá)明的發(fā)酵罐轉(zhuǎn)化工藝為：發(fā)酵罐中加入灰色鏈霉菌固定化細(xì)胞轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基，滅菌后加入0.2-0.8g/L固定化灰色鏈霉菌細(xì)胞以及轉(zhuǎn)化底物四氫巴馬汀，25-28℃、攪拌速度80-160rpm、通氣量1-1.5vvm轉(zhuǎn)化發(fā)酵24-48h，放出發(fā)酵液用于紫堇達(dá)明的分離制備，發(fā)酵罐中再加入滅菌后的轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)化底物相同條件轉(zhuǎn)化制備紫堇達(dá)明。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述一種固定化灰色鏈霉菌細(xì)胞高效轉(zhuǎn)化制備紫堇達(dá)明的方法，其特征在于：固定化灰色鏈霉菌細(xì)胞轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基為：2.5％玉米粉，0.76％豆粕，0.5％酵母粉，0.5％K₂HPO₄，0.12％葡萄糖，0.5％NaCl，0.01％MgSO₄7H₂O，0.01％FeSO₄，初始pH為6.0-6.5。