[發(fā)明專利]一種促進重組蛋白胞外分泌的發(fā)酵工藝

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410208207.8
• 申請日: 2014-05-13
• 公開（公告）號: CN103981163A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發(fā)明（設計）人: 吳敬;鄒純;段緒果
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/44
• 分類號: C12N9/44;C12N9/10;C12N9/18;C12R1/19
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種提高重組蛋白的胞外生產方法，其特征在于以含有目標蛋白基因的大腸桿菌為生產菌株，發(fā)酵工藝如下：

將活化后的種子培養(yǎng)液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，通過控制攪拌轉速和通風量使溶氧維持20-30％，控制溫度為25-37℃，流加氨水控制pH7.0±0.5，培養(yǎng)6-7小時；

當溶氧快速上升至80-100％，以指數流加的方式補加補料液使溶氧維持在20-30％，溫度維持在25-37℃，流加氨水控制pH7.0±0.5。當菌體生長到一定OD₆₀₀時，添加適量的甘氨酸溶液；繼續(xù)培養(yǎng)至菌體達到一定OD₆₀₀時，添加適量的乳糖溶液進行誘導；同時溶氧控制在20-30％，控制pH7.0±0.5，誘導20-30小時。

2.權利要求1所述的方法，其特征在于，所述宿主大腸桿菌為E.coli?BL21(DE3)、E.coli?W3110、E.coli?JM109、E.coli?JM109(DE3)、E.coli?DH5α中任意一種。

3.權利要求2所述的方法，其特征在于，所述宿主大腸桿菌為E.coli?BL21(DE3)。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述甘氨酸的添加方式為一次性添加，分批添加或者連續(xù)添加。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于所述甘氨酸的添加方式為連續(xù)添加，添加速度為0.01-10g/L/h。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述開始添加甘氨酸的時機為OD₆₀₀達到0-50。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述乳糖的添加方式為一次性添加，分批添加或者連續(xù)添加。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于所述乳糖的添加方式為連續(xù)添加，添加速度為0.01-10g/L/h。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述開始流加乳糖的時機為OD₆₀₀達到10-50。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于種子活化用培養(yǎng)基的組成為(g/L)：工業(yè)級蛋白胨10，工業(yè)級酵母粉5，NaCl10，pH7.10。發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為(g/L)：甘油6，工業(yè)級蛋白胨12，工業(yè)級酵母粉24，KH₂PO₄2.31，K₂HPO₄·3H₂O16.43，微量元素液10mL/L。