[發(fā)明專利]一種太子參藥材或原植物的快速分子鑒別方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410206387.6
• 申請日: 2014-05-15
• 公開（公告）號: CN104017863A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周濤;趙丹;江維克;袁媛;肖承鴻
• 申請（專利權(quán)）人: 貴陽中醫(yī)學(xué)院;貴州三泓藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京聯(lián)創(chuàng)佳為專利事務(wù)所(普通合伙) 11362
• 代理人: 郭防

1.太子參藥材或原植物快速分子鑒別的特異性DNA片段，其序列如序列表中序列1所示。

2.太子參藥材或原植物快速分子鑒別的一組引物，該組引物由序列表中序列1所示序列設(shè)計合成，其序列如序列表中序列2和序列3所示。

3.權(quán)利要求2所述的引物在太子參藥材或原植物的快速分子鑒別中的應(yīng)用。

4.包括權(quán)利要求2所述引物的試劑盒。

5.太子參藥材或原植物的快速分子鑒別方法，其特征在于，包括以下步驟：利用序列為序列2和序列3所示的引物對鑒別樣品進行PCR反應(yīng)；PCR反應(yīng)產(chǎn)物中加入SYBR?Green?I核酸熒光染料，混勻后在紫外光下觀察，PCR反應(yīng)產(chǎn)物產(chǎn)生綠色熒光的樣品即為太子參藥材或原植物，PCR反應(yīng)產(chǎn)物未產(chǎn)生綠色熒光的樣品即為其它植物材料。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的太子參藥材或原植物的快速分子鑒別方法，其特征在于，所述的對鑒別樣品進行PCR反應(yīng)包括：提取鑒別樣品的基因組DNA，用該基因組DNA作為模板，利用序列為序列2和序列3所示的引物進行PCR反應(yīng)。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的太子參藥材或原植物的快速分子鑒別方法，其特征在于，所述的提取鑒別樣品的基因組DNA具體包括以下步驟：取鑒別樣品1～5mg，用植物DNA提取試劑盒、CTAB提取法或堿裂解法提取基因組DNA。

8.根據(jù)權(quán)利要求5～7任一所述的太子參藥材或原植物的快速分子鑒別方法，其特征在于，所述的PCR反應(yīng)體系為25μL，反應(yīng)液組成為：Taq酶預(yù)混液5～13μL，上游和下游引物各為10～25pmol，DNA模板20～150ng，滅菌重蒸水加至25μL；反應(yīng)程序為：93～96℃預(yù)變性1～5min，93～96℃變性5～30s，52～64℃退火延伸15～40s，變性、退火延伸共進行30～40次循環(huán)；最后71～73℃后延伸1～5min；PCR產(chǎn)物的檢測：PCR反應(yīng)產(chǎn)物中加入1～5μL100×SYBR?Green?I核酸熒光染料，混勻后在300～400nm紫外光下觀察。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的太子參藥材或原植物的快速分子鑒別方法，其特征在于，所述的PCR反應(yīng)體系為25μL，反應(yīng)液組成為：Taq酶預(yù)混液5.5～7μL，上游和下游引物各為10～15pmol，DNA模板20～100ng，滅菌重蒸水加至25μL；反應(yīng)程序為：94～95℃預(yù)變性1～2min，94～95℃變性5～8s，56～62℃退火延伸15～20s，變性、退火延伸共進行30～35次循環(huán)；最后72～73℃后延伸1～2min；PCR產(chǎn)物的檢測：PCR反應(yīng)產(chǎn)物中加入1～2μL100×SYBR?Green?I核酸熒光染料，混勻后在340～380nm紫外光下觀察。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的太子參藥材或原植物的快速分子鑒別方法，其特征在于，所述的PCR反應(yīng)體系為25μL，反應(yīng)液組成為：Taq酶預(yù)混液5.5μL，上游和下游引物各為10pmol，DNA模板20～80ng，滅菌重蒸水加至25μL；反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性1min，95℃變性5s，56℃退火延伸15s，變性、退火延伸共進行30次循環(huán)；最后72℃后延伸1min；PCR產(chǎn)物的檢測：PCR反應(yīng)產(chǎn)物中加入1μL100×SYBR?Green?I核酸熒光染料，混勻后在365nm紫外光下觀察。