[發明專利]一種肝病輔食型鱈魚皮膠原蛋白肽的制備方法

有效

• 申請號: 201410200628.6
• 申請日: 2014-05-14
• 公開（公告）號: CN104152518B
• 公開（公告）日: 2017-01-11
• 發明（設計）人: 丁國芳;滕芳芳;楊最素;劉晨晨
• 申請（專利權）人: 浙江海洋學院
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司33109
• 代理人: 尉偉敏

1.一種肝病輔食型鱈魚皮膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）鱈魚皮預處理：將鱈魚皮洗凈后用4℃純水浸泡20-30min，后用濃度0.1-0.2mol/L?NaOH?浸泡?6-8小時，用清水沖洗至?pH=7，瀝干水分后，用濃度0.1-0.2mol/L的冰醋酸溶脹10-12小時，最后用剪刀剪碎；

（2）酶解反應：將步驟（1）預處理后的鱈魚皮與水按照1:4（w/v）的料液比混合，然后加入胰蛋白酶酶解反應；

（3）超濾：步驟（2）酶解反應結束后，滅酶，離心，收集上清液，上清液用超濾膜超濾，截留獲得分子量為5-10KDa的組分，冷凍干燥后得GM2組分；

（4）DEAE-Sepharose?FF離子交換層析分離：將GM2組分上DEAE-Sepharose?FF離子交換柱，采用pH4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖液作為洗脫劑洗脫，收集洗脫液，冷凍干燥后得到GM2-2組分；

（5）Sephadex?G-25層析分離：將GM2-2組分經Sephadex?G-25凝膠柱洗脫后，從上樣開始計時，收集90-100min時間段洗脫液獲得GM2-2-3組分，冷凍干燥后得到肝病輔食型膠原蛋白肽。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（2）酶解條件為：胰蛋白酶用量為每g鱈魚皮加入2000U，酶解溫度50℃，pH?6，時間8h。

3.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于：步驟（4）中DEAE-Sepharose?FF離子交換柱的洗脫條件具體為：?GM2組分加超純水配制成200mg/ml的溶液上樣，每次上樣量為2ml，洗脫速度為1ml/min。

4.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于：步驟（5）中Sephadex?G-25凝膠柱的洗脫條件具體為：

柱尺寸：2.6×80cm；柱料：Sephadex?G-25，以5mg/ml壓柱12h，至填充量為70±1cm；將GM2-2組分加超純水配制成1mg/ml的溶液上樣，上樣量：1.5ml，超純水洗脫，洗脫速度：0.5ml/min。