[發(fā)明專利]Let-7家族miRNA在制備治療神經(jīng)再生相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410196623.0
• 申請(qǐng)日: 2014-05-09
• 公開（公告）號(hào): CN103933582A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李石營;顧曉松;丁斐;顧蕓;王勇軍;于彬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南通大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K48/00
• 分類號(hào): A61K48/00;A61P25/02;A61P25/28
• 代理公司: 南京知識(shí)律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 張鉑

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物學(xué)領(lǐng)域，具體是基因治療領(lǐng)域，更具體的是Let-7家族miRNA在制備治療神經(jīng)再生相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

神經(jīng)損傷是臨床常見病例，且發(fā)病率呈逐年增加趨勢。神經(jīng)營養(yǎng)因子(neurotrophic?factor，NTF)是對(duì)神經(jīng)細(xì)胞起特殊營養(yǎng)作用的多肽分子，不僅參與調(diào)節(jié)神經(jīng)元的發(fā)育和成熟，而且在成年神經(jīng)系統(tǒng)中也發(fā)揮效應(yīng)，具有抑制成年神經(jīng)元損傷后凋亡、促進(jìn)神經(jīng)再生、調(diào)節(jié)突觸可塑性和傳遞神經(jīng)遞質(zhì)等功能。有報(bào)道NTF在胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化、神經(jīng)再生、創(chuàng)傷愈合、免疫調(diào)節(jié)及腫瘤發(fā)生等許多方面都發(fā)揮著重要的生物學(xué)調(diào)節(jié)作用。NGF(神經(jīng)生長因子)是最早確認(rèn)而且研究得最為清楚的神經(jīng)營養(yǎng)因子，是由神經(jīng)元、神經(jīng)支配的靶組織或膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的能促進(jìn)中樞和外周神經(jīng)分化、生長和存活的活性蛋白質(zhì)，在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和正常的生理功能維持以及神經(jīng)損傷后的再生中起著重要作用。再生微環(huán)境中的神經(jīng)生長因子(NGF)具有明顯的促神經(jīng)再生的作用，因此外源加入或肌肉注射NGF治療神經(jīng)損傷得到了廣泛的研究，我們課題組也在人工神經(jīng)移植物中嘗試加入NGF來修復(fù)長距離坐骨神經(jīng)缺損，取得良好效果，但NGF不易通過血神經(jīng)屏障，生物活性半衰期較短，而長期大量用藥會(huì)引起毒副作用，在臨床應(yīng)用中注射部位肌痛和痛覺過敏等導(dǎo)致了盡管NGF有很好的修復(fù)神經(jīng)再生效果，但至今仍難應(yīng)用于臨床，因此開發(fā)一種可以調(diào)控NGF表達(dá)的藥物來替代NGF的使用有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

miRNA(microRNA，微RNA)是一類長度約22nt的非編碼小分子RNA，由其前體分子在酶的作用下加工生成，廣泛存在于生物體中。在動(dòng)物機(jī)體,miRNA通過轉(zhuǎn)錄后調(diào)控許多基因和蛋白的表達(dá)，通過核酸序列互補(bǔ)性結(jié)合到特定的靶mRNA上來調(diào)節(jié)靶mRNA翻譯或降解靶基因mRNA，是一種起負(fù)調(diào)控作用的分子。目前研究顯示miRNA參與了生物體發(fā)育、分化、生長、免疫應(yīng)答等生理過程，且其表達(dá)及功能失調(diào)可能導(dǎo)致腫瘤發(fā)生，自身免疫性疾病以及病毒感染等多種病理現(xiàn)象，miRNA在神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)控作用也逐漸被人報(bào)道。基礎(chǔ)和臨床研究表明，miRNA無論在正常生理過程還是在疾病過程中都是重要的調(diào)節(jié)因子。不同于以往的有或無的調(diào)節(jié)特點(diǎn)，miRNA主要是在數(shù)量上對(duì)靶基因進(jìn)行調(diào)節(jié)。這一特點(diǎn)是mi?RNA單靶點(diǎn)強(qiáng)大的調(diào)節(jié)作用或一些分子的拮抗劑和激動(dòng)劑所無法比擬的。這展示了miRNA在臨床應(yīng)用方面的巨大前景。

let-7家族miRNA是一組序列高度同源，功能相似的miRNA,包括miR-98,let-7a,let-7b,let-7c,let-7d,let-7e,let-7f,let-7g,let-7i。let-7家族miRNA在物種間高度保守，某些成員受甲基化、轉(zhuǎn)錄后修飾及Lin28基因的調(diào)控，同時(shí)也調(diào)節(jié)RAS、HMGA2、CDC25A、CDK6、FAS、CASP3等靶基因，與生命中的多種的生物學(xué)現(xiàn)象和生理過程息息相關(guān)。

現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道了let-7家族miRNA相關(guān)的功能主要包括在腫瘤發(fā)生中的調(diào)節(jié)作用、對(duì)凋亡的調(diào)節(jié)作用以及在發(fā)育過程中的調(diào)節(jié)作用。迄今為止還沒有關(guān)于miRNA調(diào)節(jié)NGF的相關(guān)報(bào)道，對(duì)于let-7家族miRNA在神經(jīng)再生領(lǐng)域的功能也缺乏清楚的了解。因此，本領(lǐng)域?qū)τ谡{(diào)節(jié)NGF的新靶點(diǎn)和手段有迫切的需要。

發(fā)明內(nèi)容

本研究首次證實(shí)let-7家族miRNA可直接靶向調(diào)控NGF的表達(dá)，首次探討了let-7家族miRNA在神經(jīng)損傷再生過程中的調(diào)控作用，豐富了miRNA對(duì)神經(jīng)再生的調(diào)控作用研究，有助于Let-7家族miRNA作為調(diào)控NGF的新的治療靶點(diǎn)的研究與開發(fā)。

本發(fā)明的目的是提供let-7家族miRNA在在制備治療神經(jīng)再生相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明具體技術(shù)方案如下：

本發(fā)明提供了let-7家族miRNA及其調(diào)節(jié)劑或者經(jīng)化學(xué)修飾的let-7家族miRNA及其調(diào)節(jié)劑在制備治療神經(jīng)再生相關(guān)疾病的藥物中的用途，所述治療神經(jīng)再生的相關(guān)疾病是指周圍神經(jīng)損傷、中樞神經(jīng)損傷、視神經(jīng)損傷或腦損傷疾病，所述let-7家族miRNA選自miR-98，let-7a，let-7b，let-7c，let-7d，let-7e，let-7f，let-7g，let-7i，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1-9所示。

上述調(diào)節(jié)劑選自所述let-7家族miRNA的抑制劑或增效劑，抑制劑優(yōu)選let-7家族miRNA的反義核酸序列；增效劑優(yōu)選是let-7家族miRNA模擬核酸。