[發(fā)明專利]bbeAMP基因、其編碼的蛋白質(zhì)、以bbeAMP為目的基因生產(chǎn)的融合蛋白及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410195720.8
• 申請日: 2014-05-09
• 公開（公告）號: CN103966229A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐安龍;元少春;胡金茹
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/10;C07K14/435;C12N15/70;C07K19/00;C07K1/22;A61K38/17;A61P31/04
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利代理有限公司 44202
• 代理人: 宋靜娜;郝傳鑫

1.bbeAMP基因，其特征在于：bbeAMP基因的DNA序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。

2.制備權(quán)利要求1所述bbeAMP基因的方法，其特征在于：所述bbeAMP基因的制備方法包括以下步驟：

(1)從已有的中國白氏文昌魚中提取總RNA；

(2)以步驟(1)中提取的總RNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA；

(3)以cDNA為模板、以SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8為上、下游引物，通過PCR擴(kuò)增得到beeAMP基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備bbeAMP基因的方法，其特征在于：所述總RNA采用Trizol試劑提取。

4.由權(quán)利要求1所述bbeAMP基因編碼的蛋白質(zhì)，其特征在于：所述bbeAMP基因編碼的蛋白質(zhì)的氨基酸序列如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示。

5.以權(quán)利要求1所述基因?yàn)槟康幕蛏a(chǎn)重組融合蛋白的方法，其特征在于：所述生產(chǎn)重組融合蛋白的方法包括以下步驟：

(1)重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建：以含有SEQ ID NO：1所示基因的pGEX Teasy質(zhì)粒為模板、以SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10為上、下游引物或者以含有SEQ ID NO：2所示基因的pGEX Teasy質(zhì)粒為模板、以SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12為上、下游引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體pET-32a(+)上，得到重組表達(dá)質(zhì)粒；

(2)重組融合蛋白的表達(dá)：將步驟(1)所得的重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中，培養(yǎng)基因工程菌、誘導(dǎo)重組融合蛋白表達(dá)；

(3)純化步驟(2)所得的重組融合蛋白；

(4)將步驟(3)所得純化融合蛋白的洗脫液透析除鹽，濃縮凍干，得到純的重組融合蛋白。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生產(chǎn)重組融合蛋白的方法，其特征在于：所述重組融合蛋白表達(dá)過程中，基因工程菌在氨芐抗性2×YT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，采用的誘導(dǎo)劑為IPTG。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生產(chǎn)重組融合蛋白的方法，其特征在于：所述純化重組融合蛋白的方法為親和層析法。

8.一種采用權(quán)利要求5至7中任一項(xiàng)所述方法制備的重組融合蛋白。

9.權(quán)利要求8所述的重組融合蛋白在制備輔助治療感染性疾病藥物中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的重組融合蛋白在制備輔助治療感染性疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述重組融合蛋白可與革蘭氏陽性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌結(jié)合。