[發明專利]一種試劑及其在二價銅離子檢測中的應用

無效

• 申請號: 201410194130.3
• 申請日: 2014-05-08
• 公開（公告）號: CN103980189A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: 陰彩霞;霍方俊
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C07D213/66
• 分類號: C07D213/66;G01N21/64
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

技術領域

本發明涉及二價銅離子的檢測技術，具體涉及一種試劑及其合成方法，以及這種試劑在檢測二價銅離子中的應用。

背景技術

化學傳感器近年來由于其測定的簡單性和效果的明顯性被廣泛用于目標分子的檢測。我們知道，銅在環境，生物和化學系統中具有舉足輕重的作用是必不可少的軟過渡金屬離子。銅的化合物也用于植物病害處理、自來水處理，以及用作木材和皮革的防腐劑。雖然生物體對少量銅的攝取是不可缺少的，但高劑量的銅對生物體是有害的，甚至有毒。銅中毒引起氧化應激及相關癥狀，這可能導致糖尿病和許多神經退行性疾病如老年癡呆癥，帕金森，Menke綜合癥，威爾遜。由于其顯著的生理意義和相關生物的影響，高選擇性和高靈敏的銅傳感器引起了極大的興趣。

吡哆醛是比色或熒光化學傳感器在特定重金屬和過渡金屬離子發展的理想平臺。我們合成了吡哆醛肼的化學探針，此探針能在準水相中對銅離子進行快速、高選擇性和高靈敏性檢測，此探針還能用于細胞成像。

發明內容

本發明的目的是提供一種選擇性高、能定量檢測Cu²⁺的新的試劑，該試劑合成方法簡單，檢測方法便于操作，該試劑還能用于細胞成像。

本發明提供的快速檢測Cu²⁺的試劑和方法，是基于一種吡哆醛肼，在pH為7.4的HEPES溶液和甲醇混合溶液中定量地檢測Cu²⁺的含量。該檢測方法，對Cu²⁺顯示了高的靈敏性和選擇性，檢測過程簡便、靈敏、快速，檢測結果準確。

該試劑的結構是：

該試劑的合成方法，步驟為：將吡哆醛鹽酸和過量的水合肼，在乙醇中回流8小時，冷卻抽濾，再用乙醇和水重結晶得到白色的固體。

用該試劑檢測Cu²⁺的方法，步驟為：

(1)、配制pH＝7.4、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，配制2mM的吡哆醛肼的甲醇溶液；

(2)、按體積比1000:1000:1，將HEPES緩沖溶液、甲醇溶液和吡哆醛肼的甲醇溶液加到干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入,455nm的熒光強度逐漸增強；

(3)、用蒸餾水配制2mM的Cu²⁺溶液，把1mL的HEPES緩沖溶液、1mL的甲醇溶液、200μL的吡哆醛肼甲醇溶液加到另一個熒光比色皿中，分別在加入二價銅離子溶液的體積為10、20、30、40、50、60、70、80μL時，在熒光分光光度儀上測定455nm對應的熒光強度F為177、153、131、110、88、63、42、17，以Cu²⁺濃度為橫坐標，以相對熒光強度F₀－F為縱坐標繪制圖，F₀﹦201，得到Cu²⁺濃度的工作曲線；線性回歸方程為：F₀－F＝3.28+2.23c，c的單位為μM；

(4)、將HEPES緩沖溶液1000μL、甲醇溶液1000uL和吡哆醛肼甲醇溶液200uL加到干凈的熒光比色皿中，用微量進樣器吸取VμL待測樣品溶液，加入到此干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，將測得的熒光強度代入(3)的線性回歸方程，得到濃度c，待測樣品C_待測樣＝(2200+V_待測樣)μL×c×10^-6/VμL,即可求得Cu²⁺的濃度。

本發明具有如下優點和效果：1、合成了一種新的吡哆醛肼化合物；2、本發明的檢測方法，對Cu²⁺顯示了高的靈敏性和選擇性；3、檢測手段簡單，只需要借助熒光分光光度儀即可實現。

附圖說明

圖1a實施例1制備得到的試劑的核磁¹HNMR圖譜

圖1b實施例1制備得到的試劑的核磁¹³CNMR圖譜

圖1c實施例1制備得到的試劑的質譜圖

圖2實施例2試劑與Cu²⁺作用的熒光發射圖

圖3實施例3試劑與各種分析物的熒光柱狀圖

圖4實施例4測定Cu²⁺的工作曲線

圖5實施例5細胞成像圖

具體實施方式

實施例1

0.2036g吡哆醛鹽酸和1.2mL85％水合肼在20mL乙醇中回流8小時，冷卻并抽濾，用1:1的乙醇和水20mL重結晶得白色的固體產品。