[發(fā)明專利]一種適合于南疆特色果樹高質(zhì)量RNA分離的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410191027.3
• 申請日: 2014-04-29
• 公開（公告）號(hào): CN103966199A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金強(qiáng);張銳;王艷;高疆生
• 申請（專利權(quán)）人: 塔里木大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種適合于南疆特色果樹高質(zhì)量RNA分離的方法，其特征在：具體包括以下步驟：

(1)準(zhǔn)備：將要進(jìn)行RNA分離操作的室內(nèi)溫度控制在-17℃，用于研磨樣品的研缽于-80℃預(yù)冷，用75％乙醇擦洗超凈臺(tái)，并紫外燈照射超凈臺(tái)30min，以下所有加樣、吸上清操作(除了離心)均應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，高速冷凍離心機(jī)必須提前預(yù)冷至4℃；

(2)在2mL離心管中加入1500μL硼砂-CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)提取緩沖液和26μLβ-巰基乙醇，于恒溫水浴鍋中65℃溫浴5分鐘；

(3)取出預(yù)冷好的研缽，先加入少許液氮再次預(yù)冷，同時(shí)加入1g樣品和10％PVPP(聚乙烯比咯烷酮)，迅速研磨樣品，其間，加2-3次液氮反復(fù)研磨，將研磨成粉末狀的樣品加入預(yù)熱好的離心管中，渦旋震蕩混勻后，再次放回恒溫水浴鍋中65℃溫浴5min，每一分鐘顛倒離心管一次；

(4)溫浴結(jié)束后，于高速冷凍離心機(jī)中，10000r/min，4℃，離心10min；

(5)轉(zhuǎn)移離心管中的上清液到另一個(gè)2mL離心管中，加入等體積的酚∶氯仿∶異戊醇(25∶24∶1)，輕微振蕩混勻，于高速冷凍離心機(jī)中，10000r/min，4℃，離心10min；

(6)重復(fù)第5步一次；

(7)轉(zhuǎn)移離心后的上清液到另一個(gè)2mL離心管中，再用氯仿∶異戊醇(24∶1)抽提2次，即加完氯仿∶異戊醇(24∶1)后，輕微振蕩混勻，于高速冷凍離心機(jī)中，10000r/min，4℃，離心10min，重復(fù)操作兩次；

(8)轉(zhuǎn)移上清到另一個(gè)1.5mL離心管中，加入上清液0.6倍體積的異丙醇，輕輕搖勻，-20℃下沉淀RNA，30min；

(9)于高速冷凍離心機(jī)中，12000r/min，4℃，離心20min，倒掉上清，用500μL75％乙醇漂洗沉淀1-2次，12000r/min，4℃，離心10min；

(10)用移液器將離心后剩下的乙醇吸干，在超凈臺(tái)內(nèi)揮發(fā)5min，沉淀干燥后，用40μLDEPC(焦碳酸二乙酯)處理過的超純水溶解RNA沉淀；

(11)用1%的瓊脂糖凝膠，電泳檢測RNA質(zhì)量。