[發(fā)明專利]一種重組偽狂犬病病毒及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410183100.2
• 申請(qǐng)日: 2014-04-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104130982A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃紅亮;陳瑞愛(ài);謝小雨;任常寶;何玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司;廣東大華農(nóng)動(dòng)物保健品股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N7/01
• 分類號(hào): C12N7/01;C12N15/63;A61K39/295;A61K39/12;A61K39/245;A61P31/20;A61P31/22;C12R1/93
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)哲力專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 44288
• 代理人: 湯喜友

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動(dòng)物病毒基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種重組偽狂犬病病毒及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。?

背景技術(shù)

偽狂犬病病毒(Pseudorabies?virus,PRV)屬于皰疹病毒(Herpesviridae)α皰疹病毒亞科(Alpha-herpesvirinae)水痘病毒屬(Varicello?virus)的皰疹病毒I型(Porcine?herpesvirus?Type?I)，能引發(fā)豬的嚴(yán)重疾病。偽狂犬病在豬常呈爆發(fā)性流行，對(duì)妊娠母豬的危害尤其嚴(yán)重，常引起死胎、流產(chǎn)、木乃伊；后備母豬和空懷母豬感染病毒后可引起不育癥，不發(fā)情、返情和屢配不孕。公豬感染后表現(xiàn)為睪丸腫脹、萎縮，失去種用能力。新生仔豬感染PRV后大量死亡，15日齡以內(nèi)死亡率可達(dá)100％，3～4周齡仔豬的死亡率可達(dá)30％～40％。育肥豬感染偽狂犬病毒后，則表現(xiàn)為發(fā)熱，呼吸道癥狀以及生長(zhǎng)遲緩，影響增重，降低飼料報(bào)酬。除豬以外的其它動(dòng)物發(fā)生該病表現(xiàn)為發(fā)熱、奇癢及腦脊髓炎癥狀，均以死亡而告終，但表現(xiàn)為散發(fā)或呈地方性流行。同時(shí)，豬既是偽狂犬病病毒的貯存者，也是偽狂犬病毒的傳染源，控制豬偽狂犬病不僅對(duì)養(yǎng)豬業(yè)本身，而且對(duì)其它動(dòng)物養(yǎng)殖的順利發(fā)展也有著十分重要的意義。疫苗免疫接種是預(yù)防控制與消滅偽狂犬病的根本措施。目前市售的PRV疫苗絕大多數(shù)為具有鑒別診斷能力的活疫苗，有匈牙利的天然弱毒Bartha-K/61株疫苗產(chǎn)品，及四川農(nóng)大郭萬(wàn)柱教授主持研發(fā)的豬偽狂犬病活疫苗(SA215株)和華中農(nóng)業(yè)大學(xué)陳煥春教授主持研發(fā)的?豬偽狂犬病活疫苗(HB98株)。該類疫苗已投放市場(chǎng)使用多年，對(duì)豬偽狂犬的預(yù)防與控制發(fā)揮了重要作用。SA215株與HB98株均為基因工程活疫苗毒株，即采用分子生物學(xué)方法缺失其母本病毒的主要毒力基因(如TK)與非必須糖蛋白基因(如gE、gI)，使其毒力大大降低，并具有鑒別診斷能力，為豬偽狂犬病的控制做出了巨大貢獻(xiàn)。?

自1991年在加拿大北部豬群中出現(xiàn)由豬圓環(huán)病毒2型(Porcine?circovirus?Type2，PCV2)感染引起的PMWS以來(lái)，全球的絕大多數(shù)國(guó)家和地區(qū)均相繼有PCV2感染及導(dǎo)致的疾病的報(bào)道。PCV2感染不僅引起PMWS、PDNS等PCV2相關(guān)疾病，感染豬死亡率高，而且其主要病毒特征為淋巴系統(tǒng)損傷和免疫缺陷，造成感染豬對(duì)其它病原的易感性增高，因此，PCV2感染給各國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失和潛在危險(xiǎn)，成為了嚴(yán)重危害世界養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病。?

在我國(guó)，通過(guò)血清學(xué)和流行病學(xué)調(diào)查證實(shí)PCV2感染相當(dāng)嚴(yán)重，全國(guó)各省(市)的大小豬場(chǎng)均存在PCV2感染。2002年由PCV2感染引起的PMWS在全國(guó)各地呈暴發(fā)流行，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失，己成為我國(guó)規(guī)模化豬場(chǎng)危害養(yǎng)豬生產(chǎn)的重要免疫抑制性疫病之一。據(jù)2011年各科研院所的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，我國(guó)豬場(chǎng)的PCV2陽(yáng)性率已達(dá)100％，具有流行范圍廣、各生長(zhǎng)階段豬感染嚴(yán)重、混合感染突出等特點(diǎn)，嚴(yán)重威脅我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。PCV2對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的另一影響為其感染可導(dǎo)致其它疫苗免疫時(shí)的免疫效力顯著降低。?

由于PCV2感染細(xì)胞后不表現(xiàn)細(xì)胞病變、病毒增殖滴度低，為疫苗的研制造成了極大的困難。直至2007年，全球第一個(gè)PCV2疫苗即梅里亞在歐盟被批準(zhǔn)上市，隨后先后有英特威Circumvent^TM、富道Suvaxyn及勃林格CircoFLEX^TM上市，但僅勃林格CircoFLEX^TM在我國(guó)成功獲批上市。2010年后，我國(guó)先后有5個(gè)PCV2全病毒滅活疫苗批準(zhǔn)上市。該類疫苗由于生產(chǎn)成?本高，價(jià)格昂貴，仔豬用疫苗每頭份10～14元，按免疫兩次計(jì)算，每頭仔豬的費(fèi)用至少30元，母豬用疫苗每頭份至少30元，一般至少免疫3次，每頭豬的費(fèi)用為90元以上，由此可見(jiàn)，該類疫苗的使用大大提高了養(yǎng)豬的成本。?

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種重組偽狂犬病病毒，應(yīng)用于活疫苗中具有高安全性和有效性。?

本發(fā)明的另一目的在于提供一種重組偽狂犬病病毒的構(gòu)建方法，通過(guò)分子生物學(xué)手段獲得一種重組偽狂犬病病毒。?

本發(fā)明的另一方法在于提供重組偽狂犬病病毒在制備豬偽狂犬病與豬圓環(huán)病毒2型疫苗中的應(yīng)用。?

為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：?