[發(fā)明專利]一種海蜇石蠟切片制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410177824.6
• 申請日: 2014-04-29
• 公開（公告）號: CN104034570A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 董秀萍;馬璐璐;梁爽;吳瓊;傅新鑫;朱蓓薇;范馨茹;詹佳新
• 申請（專利權(quán)）人: 大連工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N1/36
• 分類號: G01N1/36;G01N1/30
• 代理公司: 大連智慧專利事務(wù)所 21215
• 代理人: 周志艦

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及到一種石蠟切片的制備方法，具體而言，是一種適用于多種海蜇原料的石蠟切片的方法。

背景技術(shù)

海蜇是一種可食用的大型水母，屬無脊椎動物腔腸動物門，世界已記錄的海蜇屬有海蜇、黃斑海蜇、棒狀海蜇和疣突海蜇。

海蜇營養(yǎng)豐富，干基中含有較高的蛋白質(zhì)及鈣、磷、碘、鐵等無機鹽和維生素等營養(yǎng)成分，除中國食用海蜇外，海蜇食品還深受日本、泰國等東亞及東南亞地區(qū)的歡迎。海蜇是我國漁業(yè)傳統(tǒng)捕撈對象，我國海蜇品質(zhì)好，產(chǎn)量高，2012年全國海蜇養(yǎng)殖產(chǎn)量63790噸，海洋捕撈量為206885噸，其中遼寧省養(yǎng)殖和捕撈量分別為42602噸和28797噸，養(yǎng)殖產(chǎn)量位于全國之首，捕撈產(chǎn)量僅次于山東和廣西位于全國第三，除內(nèi)銷外，還大量出口到日本、韓國、美國等地，具有極高的經(jīng)濟價值。

海蜇含水量極高，收獲期短，一般在溫度較高的8-9月，如果處理不及時極易腐敗變質(zhì)，因此目前海蜇除鮮食外，主要以“三礬二鹽”的傳統(tǒng)加工模式制成半干鹽漬品出售，深加工產(chǎn)品的種類極少。由于海蜇主要由水和膠原類物質(zhì)構(gòu)成，因此海蜇在加工過程中發(fā)生的組織形態(tài)的改變，可能是由于海蜇膠原類物質(zhì)的特性及其內(nèi)部組織結(jié)構(gòu)的改變所引起的。

組織學(xué)切片技術(shù)廣泛應(yīng)用于組織形態(tài)的觀察，在食品加工領(lǐng)域，與傳統(tǒng)的感官評價、質(zhì)構(gòu)學(xué)相結(jié)合，研究食品在加工過程中微觀形態(tài)與其品質(zhì)的關(guān)系。海蜇自身含水量高，組織軟、受熱易收縮等因素限制了其浸蠟和包埋效果，制作石蠟切片較為困難。因此，目前對海蜇形態(tài)學(xué)觀察多采用冰凍切片技術(shù)，應(yīng)用石蠟切片技術(shù)研究海蜇組織形態(tài)的研究較少。如中國海洋大學(xué)的孟飛等研究海蜇及熱加工過程中相應(yīng)指標(biāo)的變化(孟飛，趙雪，高昕，等.加熱條件下海蜇傘部物性學(xué)參數(shù)的變化[J].食品工業(yè)科技，2010.31(2)：142:144.孟飛，張朝輝，趙雪，等.加熱條件下沙蟄組織構(gòu)造和流變學(xué)特性的變化[J].水產(chǎn)學(xué)報，2010,34(10)：1606-1608.)，日本學(xué)者Hiromi?K等同樣利用冰凍切片，并結(jié)合掃描電鏡顯微技術(shù)，對鹽漬海蜇浸水脫鹽過程中組織結(jié)構(gòu)的變化進行了研究(Kimura?H,Haruo?M,the?late?Takahide?S,et?al.Structural?Change?of?Salted?Jellyfish?during?Cooking[J].Nippon?Suisan?Gakkaishi,1991,57(1):85-90.)

冰凍切片技術(shù)的步驟相對較少，耗時短，所用試劑少，但是切片樣品不適合長期保存，尤其是鹽漬海蜇原料含鹽量較高，受鹽的影響其冰凍切片更加困難。石蠟切片技術(shù)雖然耗時長，步驟多，但是包埋后的組織塊可長期保存，反復(fù)切片觀察，不像冰凍切片必須在規(guī)定時間內(nèi)切完，并且適用于大多數(shù)樣品。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目在于針對海蜇石蠟切片制作過程中存在的問題，提供一種適用于海蜇原料組成和組織結(jié)構(gòu)特點，能夠真實呈現(xiàn)海蜇形態(tài)的石蠟切片方法，并提供相應(yīng)的效果較好的染色方法。本發(fā)明適用于海蜇這種含水量較高，富含膠原蛋白的海產(chǎn)品石蠟切片的制作，為海蜇在加工過程中品質(zhì)的監(jiān)控提供了組織形態(tài)學(xué)支撐。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供一種海蜇石蠟切片制備方法，包括如下步驟：

S1、取材：取海蜇傘，切成條狀或塊狀；

S2、二次固定：

先用中性緩沖甲醛固定液對步驟S1所得海蜇傘進行固定，修塊后，用酒精醋酸甲醛混合固定液再次對所述海蜇傘進行固定；

S3、所述海蜇傘利用乙醇和二甲苯進行脫水和透明；

S4、透蠟與包埋；

S5、切片、展片、烘片；

S6、脫蠟復(fù)水；

S7、染色與封片：采用苦味酸-酸性復(fù)紅染色法染色，選用中性樹膠封片。

優(yōu)選方式下，步驟S2所述中性緩沖甲醛固定液配方：35～40％甲醛120ml+雙蒸水880ml+磷酸二氫鈉4.5g+磷酸氫二鈉6.39g。步驟S2所述酒精醋酸甲醛混合固定液配方:70％乙醇850ml+35～40％甲醛100ml+冰醋酸50ml。

優(yōu)選方式下，步驟S7所述苦味酸-酸性復(fù)紅配制：以1g酸性復(fù)紅溶解到100ml水中的比例得酸性復(fù)紅溶液，以1.2g苦味酸溶解到100ml水中的比例得苦味酸溶液；用時，以苦味酸溶液：酸性復(fù)紅溶液為19:1混合使用。此外，所述苦味酸-酸性復(fù)紅染色法染色之前選用蘇木精染細(xì)胞核，所述鐵蘇木精配方：甲液為蘇木精1g+95％酒精100ml；乙液為29％FeCl₃4ml+25％鹽酸1ml；用時，甲液、乙液1:1現(xiàn)用現(xiàn)配。