[發(fā)明專利]抗氯霉素和克倫特羅的雙特異性單克隆抗體及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410173658.2
• 申請(qǐng)日: 2014-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN103951755A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金仁耀;桑永玉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江工商大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K16/46
• 分類號(hào): C07K16/46
• 代理公司: 杭州浙科專利事務(wù)所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗氯霉素和克倫特羅的雙特異性單克隆抗體及其制備方法。

背景技術(shù)

免疫分析法(Immunoassay，IA)起始于20世紀(jì)50年代，首先應(yīng)用于體液大分子物質(zhì)的分析，1960年，美國學(xué)者Yalow和Berson等將放射性同位素示蹤技術(shù)和免疫反應(yīng)結(jié)合起來測(cè)定糖尿病人血漿中的胰島素濃度，創(chuàng)立了放射免疫分析技術(shù)。1968年，Oliver將地高辛同牛血清白蛋白結(jié)合，使之成為人工抗原，免疫動(dòng)物后成功獲得了抗地高辛抗體，從而開辟了用免疫分析法測(cè)定小分子藥物的新領(lǐng)域。在RIA的基礎(chǔ)上，隨著新的標(biāo)記物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)及新的標(biāo)記方法的使用，以及電子計(jì)算機(jī)、自動(dòng)控制技術(shù)的廣泛應(yīng)用，派生出許多新的檢測(cè)技術(shù)，使免疫分析法逐漸發(fā)展成為一門新型的獨(dú)立學(xué)科。

由于免疫分析試劑在免疫反應(yīng)中所體現(xiàn)出的獨(dú)特的選擇性和極低的檢測(cè)限，使這種分析手段在臨床、生物制藥和環(huán)境化學(xué)等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。各種標(biāo)記技術(shù)(放射性標(biāo)記、酶標(biāo)記、熒光標(biāo)記、金標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光等)的發(fā)展，使免疫分析的選擇性更加突出。標(biāo)記免疫分析一般是將酶、熒光素、放射性核素等標(biāo)記物對(duì)抗體或抗原進(jìn)行標(biāo)記，這種標(biāo)記物既保持了抗體或抗原的活性，也不影響標(biāo)記物的活性，當(dāng)它與相應(yīng)抗體或抗原反應(yīng)后，可以直接測(cè)定復(fù)合物中的標(biāo)記物，從而直接對(duì)目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行定量分析。通過標(biāo)記物的信號(hào)放大作用，可以提高免疫分析技術(shù)的敏感性。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)以其特異性強(qiáng)、靈敏度高、方便快捷、分析容量大、檢測(cè)成本低、安全可靠等優(yōu)點(diǎn)，已成為21世紀(jì)最具競爭性和挑戰(zhàn)性的檢測(cè)分析技術(shù)。

目前采用免疫分析方法進(jìn)行多殘留檢測(cè)常有兩種方法，一種是采用一類藥物的共有結(jié)構(gòu)作為免疫半抗原，獲得對(duì)同類藥物具有特異性識(shí)別反應(yīng)的廣譜抗體。另一種是采用將多個(gè)藥物的半抗原偶聯(lián)到載體蛋白上制備成人工抗原，經(jīng)過動(dòng)物免疫獲得對(duì)目標(biāo)農(nóng)藥有特異性識(shí)別的“寬譜特異性抗體（broad?specificity?antibody）”，達(dá)到多殘留檢測(cè)的目的。抗體在多殘留免疫分析中的作用非常關(guān)鍵，抗體質(zhì)量的好壞直接影響免疫分析的準(zhǔn)確性和靈敏度，因此獲得好的抗體是多殘留免疫分析技術(shù)的首要工作，已報(bào)道的藥物多殘留免疫檢測(cè)的抗體均為多克隆抗體，由于多克隆抗體會(huì)隨著動(dòng)物種類及個(gè)體差異而有變化，生產(chǎn)數(shù)量上也會(huì)受到一定的限制，制備的抗體可重復(fù)性差，在應(yīng)用中會(huì)受到一定的限制，隨著單克隆抗體技術(shù)的出現(xiàn)，解決了抗體制備過程中抗體性狀不穩(wěn)定的問題，并且單克隆抗體技術(shù)獲得的雜交瘤細(xì)胞在體外能無限量分泌性狀穩(wěn)定的抗體，因此，在小分子藥物免疫分析中單克隆抗體已逐漸取代多克隆抗體。

傳統(tǒng)的免疫快速診斷技術(shù)中使用的抗體不論是多克隆抗體還是普通單克隆抗體，一個(gè)抗體分子均只識(shí)別一種或者一類抗原，使檢測(cè)范圍受到很大的限制，隨著單克隆雜交瘤技術(shù)的發(fā)展和不斷完善，?Milstein等首次報(bào)道了一株能分泌雙特異性單克隆抗體（Bispecific?Monoclonal?Antibodies,?BisMcAb）的雜交-雜交瘤（Hybrid?Hybridomas）細(xì)胞，標(biāo)志著雙特異性單克隆抗體技術(shù)的創(chuàng)立。雙特異性單克隆抗體是結(jié)構(gòu)上雙價(jià)，功能上單價(jià)的免疫球蛋白分子。其基本結(jié)構(gòu)中兩個(gè)Fab端的結(jié)構(gòu)和功能不相同，能分別結(jié)合兩種不同抗原。由于雙特異性單克隆抗體在結(jié)構(gòu)上的特殊性，具有兩個(gè)不同的抗原識(shí)別位點(diǎn)，如果能把該抗體技術(shù)引入到藥物殘留快速診斷技術(shù)中來，特別是在面臨多殘留快速檢測(cè)技術(shù)需求的背景下，在一定程度上能滿足多殘留檢測(cè)所面臨的新的要求，該技術(shù)從抗體的結(jié)構(gòu)和特性上入手，區(qū)別于傳統(tǒng)的多殘留免疫分析技術(shù)在半抗原和人工抗原的結(jié)構(gòu)上進(jìn)行一系列的改造，通過雜交-雜交瘤技術(shù)獲得能特異性識(shí)別兩種同類藥物甚至是結(jié)構(gòu)差異大得兩類藥物的雙特異性單克隆抗體，與傳統(tǒng)的抗體快速檢測(cè)相比具有質(zhì)的飛躍，為探索藥物多殘留快速檢測(cè)技術(shù)新的研究領(lǐng)域和發(fā)展方向方面具有重要意義。