[發(fā)明專利]一種全人源抗CTLA-4單克隆抗體、制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410171359.5
• 申請(qǐng)日: 2014-04-25
• 公開（公告）號(hào): CN104292334B
• 公開（公告）日: 2018-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張勝華;張守濤;張一折;郭亞楠;楊艷麗;郭奇根;于振艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南省健康偉業(yè)生物醫(yī)藥研究股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/28
• 分類號(hào): C07K16/28;C12N15/63;A61K39/395;A61P35/00;A61P31/00;A61P37/00
• 代理公司: 鄭州睿信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

本發(fā)明公開了一種全人源抗CTLA?4單克隆抗體、制備方法及應(yīng)用，屬于抗體藥物開放與生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域。通過構(gòu)建大容量天然人源噬菌體抗體庫(kù)，篩選出一種全人源抗CTLA?4單克隆抗體，對(duì)人CTLA?4分子具有高親和力和低解離速率(低免疫原性)，相較嵌合的或人源化的抗體，在施用人體時(shí)可避免很多副作用。本發(fā)明中全人源抗CTLA?4單克隆抗體的制備方法簡(jiǎn)單，在動(dòng)物細(xì)胞中高效表達(dá)，適用于規(guī)模化工業(yè)生產(chǎn)。另外，全人源抗CTLA?4單克隆抗體能顯著抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，在抗腫瘤、抗感染及治療自身免疫性疾病方面具有廣泛應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種全人源抗CTLA-4單克隆抗體，以及抗CTLA-4單克隆抗體的制備方法和應(yīng)用，屬于抗體藥物開放與生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

T細(xì)胞的激活需兩個(gè)來自細(xì)胞外的信號(hào)刺激，即T淋巴細(xì)胞活化的雙信號(hào)作用。T細(xì)胞活化的第1信號(hào)主要來自T細(xì)胞抗原識(shí)別受體(TCR)與MHC分子-抗原肽復(fù)合物的特異性結(jié)合，此過程為抗原識(shí)別。T細(xì)胞活化的第2信號(hào)又稱共刺激信號(hào)，是由抗原遞呈細(xì)胞(APC)和T細(xì)胞表面的粘附分子對(duì)提供。這些粘附分子被稱為共刺激分子，其中最重要的是T細(xì)胞表面的CD28、CTLA-4以及APC表面的相應(yīng)配體B7(包括B7-1和B7-2)。

CTLA-4(cytotoxicT lymphocyte associated antigen-4，細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4)蛋白屬于免疫球蛋白超家族，在激活的CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞及激活的B淋巴細(xì)胞表面表達(dá)。細(xì)胞激活后，CTLA-4依賴CD28在細(xì)胞表面表達(dá)增強(qiáng)，48-72h后達(dá)高峰。CTLA-4與CD28有相同的配體B7-1和B7-2，雖然活化的T細(xì)胞表面CTLA-4的數(shù)目只有CD28的3％～5％，但CTLA-4與B7的親和力比CD28強(qiáng)10-50倍。

早期研究提示CTLA-4為T細(xì)胞免疫的啟動(dòng)和發(fā)展提供共刺激信號(hào)，以補(bǔ)充CD28傳導(dǎo)的信號(hào)。但后來發(fā)現(xiàn)CTLA-4與CD28作用相反。體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)都提示CTLA-4作為CD28的拮抗劑，參與下調(diào)T細(xì)胞反應(yīng)。應(yīng)用抗CTLA-4mAbs的Fab片段，可促進(jìn)T細(xì)胞增生，促進(jìn)細(xì)胞因子表達(dá)。阻斷CTLA-4還可提高T細(xì)胞對(duì)普通抗原的反應(yīng)性，加強(qiáng)超抗原介導(dǎo)的毒性反應(yīng)，提高機(jī)體抗腫瘤、抗寄生蟲的能力。CTLA-4下調(diào)T細(xì)胞反應(yīng)的直接證據(jù)是CTLA-4基因敲除的小鼠出生后2-3周淋巴細(xì)胞增生紊亂，出現(xiàn)大量活化的T細(xì)胞及自身免疫樣的組織結(jié)構(gòu)破壞，出生后3-4周，小鼠全部死亡。CTLA-4不僅可以下調(diào)T細(xì)胞的反應(yīng)性，還可調(diào)節(jié)T細(xì)胞的分化。CTLA-4基因缺陷小鼠的CD4+T細(xì)胞以Th2細(xì)胞反應(yīng)為特征。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CTLA-4可促使幼稚的CD4+T細(xì)胞向Th1細(xì)胞發(fā)展。但有人發(fā)現(xiàn)用抗CTLA-4抗體阻斷CTLA-4PB7導(dǎo)致Th1細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫病的發(fā)生。因此，雖然CTLA-4參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的分化，但引起何種結(jié)果，目前尚無定論。還有人發(fā)現(xiàn)CTLA-4可介導(dǎo)T細(xì)胞耐受，阻斷CTLA-4可防止耐受的發(fā)生。

由于CTLA-4不僅對(duì)T細(xì)胞活化起負(fù)向調(diào)節(jié)作用，還可介導(dǎo)自身免疫耐受，誘導(dǎo)T細(xì)胞分化，維持機(jī)體細(xì)胞P體液免疫平衡。所以，CTLA-4可能與T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病、移植排斥反應(yīng)以及機(jī)體抗腫瘤、抗感染、抗過敏能力有關(guān)。有望成為腫瘤免疫治療的有效靶分子，也為HIV和HBV等慢性病毒感染性疾病及自身免疫性疾病的治療提供一個(gè)新的策略。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種全人源抗CTLA-4單克隆抗體。

同時(shí)，本發(fā)明還提供一種全人源抗CTLA-4單克隆抗體的制備方法。

最后，本發(fā)明還提供一種全人源抗CTLA-4單克隆抗體的應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：