[發明專利]沙門氏菌檢測方法及檢測用培養基

有效

• 申請號: 201410167738.7
• 申請日: 2014-04-24
• 公開（公告）號: CN103898191A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 劉輝;陳玉貞;胡光春;劉嵐錚;張濟;李健;時玉雯
• 申請（專利權）人: 濟南市疾病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 彭成

技術領域

本發明涉及一種沙門氏菌檢測方法及檢測用培養基，屬于微生物檢驗領域。

背景技術

目前，美國FDA、AOAC、ISO和中國國標等的食品中的沙門氏菌檢測基準方法都是以預增菌、增菌、分離和鑒定為基本程序，但在各種培養基上略有區別。但這些基準方法都比較耗費時間、人力和物力。為了節約人力和時間，科研人員研發了很多快速檢測方法，原理基本上都是以PCR和抗原抗體反應為基礎，在一些領域發揮了重要作用，但是在某些方面不可替代分離培養方法，原因為：1、無論PCR和抗原抗體，只能針對有限的目標基因或抗原，其在沙門氏菌2000多種血清型的覆蓋度上與分離培養法無法比擬，即敏感性方面遜于分離培養法，因此無法撼動分離培養法作為沙門氏菌檢測金標準的地位；2、某些重要項目上，取得活菌是確鑿證據；3、需要活菌進行進一步分析的時候。

關于以分離培養為基礎的方法，AOAC也驗證了一些新的方法，如MSRV(改良半固體Rappaport-Vassiladis)培養基培養法，以沙門氏菌選擇性增菌劑Rappaport-Vassiladis(RV)肉湯為基礎改進而成，該方法應用于可可制品和奶制品中的沙門氏菌分離。MSRV方法主要步驟是將樣本經緩沖蛋白胨水(BPW)預增菌及四磺酸鈉煌綠肉湯(TTB)和RV肉湯增菌后，分別吸取數滴接種于MSRV半固體平板，待沙門氏菌運動生長產生暈圈后挑取該培養物繼續進行鑒定和分離。

專利ZL201210006404.2(公開號102517375A)公開了一種利用毛細管培養法檢測微生物的方法，建立了毛細管培養檢測微生物的基本程序和方法。

發明內容

針對上述現有技術，本發明提供了一種沙門氏菌檢測方法，及檢測用培養基，其可用于檢測或篩選多種樣本中的沙門氏菌，具有快速、高效、省時省力、特異性好、敏感性強等優點。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種沙門氏菌檢測方法——毛細管培養法，步驟如下：

(一)填裝毛細管：以內徑為0.5～5mm、長度3～10cm的直管毛細管(優選內徑1mm、長度5cm的直管毛細管)為容器，裝載MSTT培養基(該培養基為本發明獨創的培養基，具體組成及制備方法見下述)或改良半固體Rappaport-Vassiladis(MSRV)培養基(該培養基為現有技術中已有的常規培養基)；

所述毛細管的材質為玻璃、透明塑料或透明合成樹脂中的任一種；

(二)檢測：進行以下兩種操作之一，或以下兩種操作都進行：

(1)將上述填裝培養基后的毛細管的一端接入待檢樣本(液態樣本)、待檢樣本的稀釋液、含有待檢樣本的預增菌液或含有待檢樣本的增菌液中，另一端密封或接入培養基(該培養基與毛細管內填裝的培養基相同)中；若毛細管中接入的培養基為MSTT培養基，則培養16<t≤48h后，進行觀察；若毛細管中接入的培養基為MSRV培養基，則培養30<t≤72h后，進行觀察；

(2)將待檢樣本(液態樣本)、待檢樣本的稀釋液、含有待檢樣本的預增菌液或含有待檢樣本的增菌液接種到四硫磺酸鈉煌綠肉湯(TTB)、Muller-Kauffmann四硫磺酸鈉新生霉素(MKTTn)肉湯、Rappaport-Vassiladis胰蛋白胨(RVS)肉湯、Rappaport-Vassiladis(RV)肉湯或亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液中，得接種液；然后將上述填裝培養基后的毛細管的一端接入接種液中，另一端密封或接入培養基(該培養基與毛細管內填裝的培養基相同)中；若毛細管中接入的培養基為MSTT培養基，則培養16<t≤48h后，進行觀察；若毛細管中接入的培養基為MSRV培養基，則培養30<t≤72h后，進行觀察；

所述觀察是指：觀察毛細管內、毛細管密封端、毛細管接入培養基的一端或毛細管所接入的培養基，觀察是否有暈環，有暈環者為疑似陽性結果，表明待檢樣本中可能含有沙門氏菌；無暈環者為陰性結果，表明待檢樣本中不含有沙門氏菌；

所述密封是指用氣密性橡膠或氣密性硅膠帽直接密封；

所述培養基(指接入毛細管的培養基)盛放在1～10mL容量的管制瓶或1～10mL容量的透明塑料瓶中(優選1mL玻璃管制瓶)，管制瓶或透明塑料瓶用氣密性橡膠塞或氣密性硅膠塞密封，毛細管穿過該硅膠塞或橡膠塞，以保證氣密性。

進一步地，還包括以下步驟：