[發(fā)明專利]CS/IL-GR修飾的牛血清白蛋白分子印跡電極的制備及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410167710.3
• 申請日: 2014-04-24
• 公開（公告）號: CN103926294A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王宗花;趙凱;夏建飛;張菲菲;夏霖;李峰;遲德玲;李延輝;夏延致;夏臨華
• 申請（專利權(quán)）人: 青島大學(xué)
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種電化學(xué)傳感器，尤其涉及CS/IL-GR修飾的牛血清白蛋白分子印跡電極的制備及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

分子印跡電化學(xué)傳感器(MIECS)結(jié)合電化學(xué)傳感器和分子印跡技術(shù)，以分子印跡聚合物作為生物識別元件來提高電化學(xué)傳感器的靈敏度和選擇性，目前已被成功用于印跡生物小分子。與此同時，印跡生物大分子尤其是印跡蛋白質(zhì)分子，并將其應(yīng)用于電化學(xué)檢測引起了研究者們越來越多的關(guān)注。但是印跡蛋白質(zhì)分子的電化學(xué)傳感器或生物傳感器的靈敏度，由于受到蛋白質(zhì)分子尺寸大、結(jié)構(gòu)多變和較低的再鍵合效率等限制，研究進(jìn)展緩慢。

石墨烯(GR)由于比表面積大、電催化性能優(yōu)異及生物相容性好，因而常被用來作為生物傳感界面來制備性能優(yōu)良的電化學(xué)生物傳感器。離子液體(ILs)是由有機(jī)陽離子和陰離子組成的液體穩(wěn)態(tài)鹽，由于離子導(dǎo)電性高和生物相容性良好已經(jīng)在電化學(xué)生物傳感器中被廣泛用于提高電化學(xué)響應(yīng)，目前，已有報道IL-GR復(fù)合物在制備電化學(xué)傳感器方面表現(xiàn)出更優(yōu)異的性能，并已成功地用于制備MIECS。

殼聚糖(CS)，(1,4)-2-乙酰氨基-2-脫氧-β-D-葡聚糖，是由甲殼素經(jīng)過脫乙酰作用后形成的一種天然高分子。殼聚糖分子中含有大量性質(zhì)活潑的氨基和羥基，利用殼聚糖豐富的-OH或-NH₂與蛋白質(zhì)分子中的-COOH通過氫鍵作用相結(jié)合，來達(dá)到在電極表面固定蛋白質(zhì)分子的目的。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了CS/IL-GR修飾的牛血清白蛋白分子印跡電極的制備及其在檢測牛血清白蛋白(BSA)的應(yīng)用，所制備的蛋白質(zhì)分子印跡電化學(xué)傳感器具有高靈敏度、高選擇性和穩(wěn)定性，具有良好的臨床應(yīng)用價值。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

CS/IL-GR修飾的牛血清白蛋白分子印跡電極的制備，其步驟如下：

(1)CS/IL-GR/GCE的制備：

將玻碳電極在金相砂紙上打磨，然后在麂皮上依次用0.3μm和0.05μm?Al₂O₃粉拋光成鏡面，用二次水沖洗電極表面，將沖洗后的電極在二次蒸餾水和乙醇中超聲洗滌20s，室溫下晾干備用；

將250μL的BmimPF₆溶于已分散好的1.0mg/mL石墨烯水溶液中，超聲分散均勻，制得離子液體-石墨烯復(fù)合物(IL-GR)溶液；然后在處理好的玻碳電極表面滴涂5.0μL的IL-GR水溶液，晾干后即得到IL-GR/GCE電極；

再在IL-GR/GCE電極表面滴涂5.0μL的含4％(w/V)殼聚糖的2％(V/V)的乙酸溶液，晾干，得殼聚糖修飾的IL-GR/GCE，即CS/IL-GR/GCE；

(2)MIPs/CS/IL-GR/GCE的制備

首先，將步驟(1)所得電極CS/IL-GR/GCE浸入含有1.0g/L?BSA和吡咯單體的除氧磷酸鹽緩沖液，在-0.2～1.2V電位范圍內(nèi)，以100mV/s的掃速循環(huán)伏安掃描至穩(wěn)定，然后取出晾干，得到聚合物修飾的CS/IL-GR/GCE，即BSA@MIPs/CS/IL-GR/GCE；然后，將含有模板分子的印跡電極BSA@MIPs/CS/IL-GR/GCE浸入1.0M?H₂SO₄溶液中，洗脫模板分子BSA，得到MIPs/CS/IL-GR/GCE；為了作為比較，采用上述方法用不同的修飾電極分別制備了BSA@MIPs/CS/GR/GCE電極和BSA@MIPs/CS/IL/GCE電極。

步驟(2)所述除氧磷酸鹽緩沖液的pH＝7.0。

本發(fā)明還提供一種利用上述方法制備的分子印跡電極MIPs/CS/IL-GR/GCE。