[發(fā)明專利]一種HPLC法檢測(cè)氯卡色林鹽酸鹽含量的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410164701.9
• 申請(qǐng)日: 2014-04-23
• 公開（公告）號(hào): CN103901151A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 衛(wèi)萍;景志勇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖北朗昕生化藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88
• 代理公司: 黃石市三益專利商標(biāo)事務(wù)所 42109
• 代理人: 瞿暉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種利用高效液相色譜法測(cè)定化學(xué)物質(zhì)含量的方法，具體是一種HPLC法檢測(cè)氯卡色林鹽酸鹽含量的方法。

背景技術(shù)

氯卡色林鹽酸鹽是一種新型的減肥處方藥，2012年6月美國(guó)食品藥品管理局(FDA)正式批準(zhǔn)了Arena制藥公司的新減肥藥lorcaserin(鹽酸氯卡色林)上市，成美國(guó)13年來(lái)首個(gè)減肥處方藥。該藥獲準(zhǔn)用于成人體質(zhì)指數(shù)(BMI)≥27的肥胖或超重者，并且患者至少有一項(xiàng)與體重相關(guān)的疾病(如高血壓、2型糖尿病或高脂血癥)。其分子式為C11H14CLN·HCL，化學(xué)名為（R）-8-氯-1-甲基-2，3，4，5-四氫-1H-3-苯并氮雜卓鹽酸鹽。

由于本發(fā)明所涉及的氯卡色林鹽酸鹽是一種剛上市的新產(chǎn)品，其含量的檢測(cè)目前沒(méi)有統(tǒng)一的方法，由于該產(chǎn)品在合成的過(guò)程中，或多或少會(huì)產(chǎn)生中間體，降解產(chǎn)物及工藝雜質(zhì)，因此進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，如何選擇適宜的檢測(cè)方法及檢測(cè)條件，使雜質(zhì)與主成分有效分離，進(jìn)而準(zhǔn)確地測(cè)定出氯卡色林鹽酸鹽的含量，是生產(chǎn)企業(yè)亟待解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是提供一種能快速準(zhǔn)確地測(cè)定氯卡色林鹽酸鹽含量的方法。

???本發(fā)明的一種HPLC法檢測(cè)氯卡色林鹽酸鹽含量的方法，包括以下步驟：

?a.配制混合空白溶液

分別取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的三氟乙酸水溶液及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的?三氟乙酸乙腈溶液（將三氟乙酸溶于乙腈中）按1:1體積比配制成空白溶液；

b.配制對(duì)照品溶液

稱取氯卡色林鹽酸鹽對(duì)照品10mg于10ml容量瓶中，加入步驟a所配制的混合空白溶液溶解，并稀釋至刻度，搖勻，制成1mg/ml的對(duì)照品溶液；

c.配制供試品溶液

稱取氯卡色林鹽酸鹽供試品10mg于10ml容量瓶中，加入步驟a所配制的混合空白溶液溶解，并稀釋至刻度，搖勻，制成1mg/ml的供試品溶液；

d.色譜條件

高效液相色譜議：安捷倫1220

色譜柱：phenomenexluna?C18,250mm*4.6mm,5μm;

混合流動(dòng)相：流動(dòng)相A：0.1%三氟乙酸水溶液及

??????????????????流動(dòng)相B：0.1%三氟乙酸乙腈溶液

采用二元梯度洗脫，一定時(shí)間內(nèi)流動(dòng)相A及流動(dòng)相B的比例如下表所示：

???

流速：1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：226nm,

進(jìn)樣體積：2μl，柱溫35℃；

e.色譜分析

在上述色譜條件下，將空白溶液、對(duì)照樣品溶液、供試品溶液分別注入色譜儀，記錄色譜圖；

f.根據(jù)對(duì)照品和供試品色譜圖中的峰面積,通過(guò)外標(biāo)法即可計(jì)算出供試品中氯卡色林鹽酸鹽的含量。

本發(fā)明方法通過(guò)對(duì)色譜條件的考察實(shí)驗(yàn)，最終確定以C18反相色譜柱，選擇三氟乙酸水溶液及三氟乙酸乙腈溶液為混合流動(dòng)相，采用二元梯度洗脫的方法，能有效將氯卡色林鹽酸鹽與其它雜質(zhì)分離，分離度大于1.5，且主峰出峰時(shí)間為10min左右；本發(fā)明采用C18柱，較經(jīng)濟(jì)實(shí)用；選用混合流動(dòng)相作為空白溶液及溶解供試品和對(duì)照品的溶劑確保了溶液系統(tǒng)的穩(wěn)定性；選擇進(jìn)樣體積2μl,說(shuō)明本方法響應(yīng)度高；選擇柱溫為35℃，提高了色譜峰的對(duì)稱性。本發(fā)明方法通過(guò)加樣回收實(shí)驗(yàn)，平均回收率為99.92%,檢測(cè)結(jié)果的RSD為1.07%，小于2.0%，說(shuō)明本方法準(zhǔn)確度高；同時(shí)該方法氯卡色林鹽酸鹽的檢測(cè)限為0.3μg，定量限為1.0μg，在0.1-1.0μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r²=0.9957））,精密度：RSD=0.5%，表明本方法精密度良好，可作為本行業(yè)的通用檢測(cè)方法申報(bào)推廣。

附圖說(shuō)明

圖1是用本發(fā)明方法測(cè)定的混合空白溶液色譜圖；

圖2是用本發(fā)明方法測(cè)定的氯卡色林鹽酸鹽對(duì)照品溶液色譜圖；

圖3是用本發(fā)明方法測(cè)定氯卡色林鹽酸鹽供試品（20140101）的色譜圖；

圖4是用本發(fā)明方法測(cè)定氯卡色林鹽酸鹽供試品（20140102）的色譜圖；

圖5是用本發(fā)明方法測(cè)定氯卡色林鹽酸鹽供試品（20140103）的色譜圖；

圖中：1—雜質(zhì)A色譜峰，2—供試品色譜峰，3—雜質(zhì)B色譜峰。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1??以湖北朗昕生化藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的氯卡色林鹽酸鹽產(chǎn)品作為供試品，測(cè)定其中氯卡色林鹽酸鹽含量，具體操作步驟如下：

1.配制混合空白溶液