[發(fā)明專利]一種骨髓去分化間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410155438.7
• 申請日: 2014-04-17
• 公開（公告）號: CN104342402B
• 公開（公告）日: 2017-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 施勤;楊惠林;張慧
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11279
• 代理人: 王正茂,郭振興

1.一種骨髓去分化間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

第一步，從骨髓中分離獲得間充質(zhì)干細胞；

第二步，將間充質(zhì)干細胞在間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基中進行細胞培養(yǎng)；

其特征在于，第二步所述的細胞培養(yǎng)的步驟中，還包括更換誘導(dǎo)培養(yǎng)基進行誘導(dǎo)培養(yǎng)的步驟。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)為將所述的間充質(zhì)干細胞在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)3-10天，優(yōu)選的為5-7天。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的間充質(zhì)干細胞為人骨髓間充質(zhì)干細胞，優(yōu)選的為3-5代的人骨髓間充質(zhì)干細胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的人骨髓間充質(zhì)干細胞具有能分化為成骨的能力。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述第二步的細胞培養(yǎng)為將細胞培養(yǎng)至處于對數(shù)生長期，優(yōu)選的，培養(yǎng)至細胞密度達到70%-90%時，棄去所述間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基，更換誘導(dǎo)培養(yǎng)基進行誘導(dǎo)培養(yǎng)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，在所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)的步驟之后，棄去誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將細胞重新置于間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)并傳代得到De-MSCs細胞，優(yōu)選的，培養(yǎng)并傳代12-14天。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，在更換誘導(dǎo)培養(yǎng)基的之前和之后還包括將培養(yǎng)基殘液清除的步驟。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的清除的步驟為用PBS進行清洗，優(yōu)選的PBS清洗2-3次。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基由以下成分配制而成：DMEM-L培養(yǎng)基、10%胎牛血清、青霉素100U/mL、鏈霉素100mg/L、L-抗壞血酸50ug/ml、β-磷酸甘油鈉10mmol/ml、地塞米松10^-8mmol/ml。