[發明專利]一種小鼠RANKL突變體表達載體及其構建、表達及應用

在審

• 申請號: 201410149498.8
• 申請日: 2014-04-14
• 公開（公告）號: CN105349560A
• 公開（公告）日: 2016-02-24
• 發明（設計）人: 彭瑩;鄧黎莉;吳郁;陳全成;丁月娣;束婷婷;付強
• 申請（專利權）人: 江蘇省原子醫學研究所
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/66;C12N5/10;C12N15/85;G01N33/68
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 趙敏

技術領域

本發明屬于微生物學、分子生物學及基因工程技術領域，具體涉及一種具有生物活性的不同半胱氨酸位點（Cys）突變的小鼠核因子κB受體活化因子配基（RANKL）的突變體表達載體及其構建、表達及應用。

背景技術

骨骼具有為了自身的形態變化和維持血鈣濃度而重復形成和吸收、進行重建的動態平衡特征。正常的骨骼通過由成骨細胞、骨細胞介導的骨形成及由破骨細胞介導的骨吸收而處于動態平衡狀態。骨骼動態平衡的維持是一個多因素、多環節的復雜調控過程，而成骨細胞、骨細胞與破骨細胞間的信號耦聯是核心。這種信號耦聯是由一系列的分泌性蛋白在起著關鍵的調控作用，而其中最為重要的便是到目前為止研究最為透徹的核因子κB受體活化因子配基(receptoractivatorofNF-κBligand，RANKL)。

在骨骼系統中，RANKL主要由成骨細胞、骨細胞表達和分泌，它通過與破骨細胞表面的RANK蛋白（即RANKL的受體）相互作用進而調節破骨細胞的分化成熟。同時，成骨細胞還會分泌骨保護素蛋白(OPG)，它通過與RANK蛋白競爭結合RANKL，從而起到抑制破骨細胞分化成熟的作用。一系列研究已經充分表明，RANKL/RANK/OPG信號體系在成骨細胞-破骨細胞耦聯及骨骼代謝平衡中具有核心作用。

RANKL蛋白在體內存在兩種形式：全長RANKL及可溶性RANKL（solubleRANKL，sRANKL）。其中，小鼠RANKL蛋白全長316個氨基酸，人RANKL蛋白全長317個氨基酸，兩者同源性達84%。而sRANKL則是分泌至細胞外的RANKL，它由一系列的蛋白酶如TACE、ADAM10和MMP-14等對全長RANKL進行剪切得到，剪切位點在小鼠RANKL的139Phe，在人RANKL的140Ile。RANKL蛋白具有典型的TNF結構域，與TNFalpha、CD40ligand、Apo2L（TRAIL）及Fasligand（FasL）等同屬TNF家族。此外，全長RANKL還包括莖狀結構區、一段短片段的疏水性跨膜區和位于RANKL氨基端1-48的低復雜性氨基酸序列。TNF結構域是RANKL-RANK及RANKL-OPG的相互作用區，是調控破骨細胞分化成熟的關鍵部位；225Glu、222Arg、299Asp氨基酸對于RANKL-RANK的相互作用是關鍵的。由于小鼠RANKL蛋白與人源RANKL蛋白的同源性較高，因此人們通常以小鼠RANKL蛋白做為研究對象，來進一步研究人RANKL蛋白的相關生理生化特征。

發明內容

為此，本發明所要解決的問題在于提供一種小鼠RANKL突變體表達載體以及表達系統，進而便于更準確的對小鼠RANKL蛋白進行深入的研究。