[發(fā)明專利]一種具有高轉(zhuǎn)糖苷活性的β-半乳糖苷酶突變體及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410148999.4
• 申請(qǐng)日: 2014-04-14
• 公開（公告）號(hào): CN103881994B
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張偉;張宇宏;劉波;孫寧;張佳琳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): C12N9/38
• 分類號(hào): C12N9/38;C12N15/56;C12N15/81;C12R1/84
• 代理公司: 北京市萬慧達(dá)律師事務(wù)所 11111
• 代理人: 楊穎;張金芝

1.一種具有高轉(zhuǎn)糖苷活性的β-半乳糖苷酶突變體，其在序列2或序列4所示的氨基酸序列的基礎(chǔ)上，通過單位點(diǎn)的定點(diǎn)飽和突變所獲得的；

其中突變位點(diǎn)為第219位、第245位或者第785位氨基酸；

其中單位點(diǎn)的定點(diǎn)飽和突變分別為用甘氨酸殘基取代第219位的絲氨酸殘基（S219G）、用谷氨酸殘基取代第219位的絲氨酸殘基（S219E）、用苯丙氨酸殘基取代第219位的絲氨酸殘基（S219F）、用纈氨酸殘基取代第219位的絲氨酸殘基（S219V）、用丙氨酸殘基取代第219位的絲氨酸殘基（S219A）、用精氨酸殘基取代第245位的苯丙氨酸殘基（F245R）、用賴氨酸殘基取代第245位的苯丙氨酸殘基（F245K）、用甘氨酸殘基取代第245位的苯丙氨酸殘基（F245G）、用絲氨酸殘基取代第245位的苯丙氨酸殘基（F245S）或用纈氨酸殘基取代第785位的谷氨酸殘基（E785V）。

2.編碼權(quán)利要求1所述突變體的DNA分子。

3.含有權(quán)利要求2所述DNA分子的重組表達(dá)載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體，其為重組酵母表達(dá)載體。

5.表達(dá)權(quán)利要求2所述DNA分子的宿主細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的宿主細(xì)胞，選自糖酵母屬、克魯維氏酵母屬、裂殖糖酵母屬和甲基營(yíng)養(yǎng)型酵母菌株。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的宿主細(xì)胞，其中甲基營(yíng)養(yǎng)型酵母菌株優(yōu)選為畢赤氏酵母屬菌株。

8.一種制備具有高轉(zhuǎn)糖苷活性的β-半乳糖苷酶的方法，包括以下步驟：

1）用權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，獲得重組菌株；

2）培養(yǎng)上述重組菌株，誘導(dǎo)重組β-半乳糖苷酶的表達(dá)；

3）回收并純化所表達(dá)的高轉(zhuǎn)糖苷活性的β-半乳糖苷酶。

9.權(quán)利要求1所述的突變體、權(quán)利要求2所述的DNA分子、權(quán)利要求3或4所述的重組表達(dá)載體、權(quán)利要求5或6所述的宿主細(xì)胞在制備β-半乳糖苷酶中的應(yīng)用。