[發(fā)明專利]一種鑒別煙粉虱隱種和白粉虱的引物及鑒別方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410145254.2
• 申請日: 2014-04-11
• 公開（公告）號: CN103898225A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉國霞;讓·弗朗西斯·皮西姆邦;宣寧;步迅;謝紅艷;岳壽松;楊連群;張全芳;范仲學(xué)
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 濟南金迪知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37219
• 代理人: 朱家富

1.一種鑒別煙粉虱MEAM1隱種、煙粉虱MED隱種和白粉虱的引物，所述引物為一對，分別為SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列。

2.一種鑒別煙粉虱MEAM1隱種、煙粉虱MED隱種和白粉虱的方法，其特征在于，步驟如下：

（1）提取待鑒別樣品的基因組DNA，得基因組DNA溶液；

所述待鑒別樣品為煙粉虱MEAM1隱種、煙粉虱MED隱種或白粉虱；

（2）以步驟（1）提取的基因組DNA為模板，利用權(quán)利要求1所述的鑒別煙粉虱MEAM1隱種、煙粉虱MED隱種和白粉虱的引物進行PCR擴增，制得的PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析，當(dāng)電泳結(jié)果中顯示有一條463bp的條帶時，待鑒別樣品為煙粉虱；當(dāng)電泳結(jié)果中沒有條帶時，則待鑒別樣品為白粉虱；

（3）用限制性內(nèi)切酶Sac?II酶切步驟（2）制得的長度為463bp的PCR擴增產(chǎn)物，制得酶切產(chǎn)物；

（4）對步驟（3）制得的酶切產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳分析，當(dāng)電泳結(jié)果中顯示有一條463bp的條帶時，則該待鑒別樣品為煙粉虱MEAM1隱種；當(dāng)電泳結(jié)果中顯示有一條235bp的條帶時，則該待鑒別樣品為煙粉虱MED隱種。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中PCR擴增的擴增體系為：

基因組DNA溶液2.5μl，20μM引物0.5μl，5U/μl?Taq酶0.25μl，10×Taq緩沖液2.5μl，10mM?dNTP0.5μl，ddH₂O補至25μl。

4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中PCR擴增的擴增條件如下：

94℃預(yù)變性2分鐘；94℃變性30秒，52℃退火30秒，72℃延伸30秒，進行35個循環(huán)；72℃延伸7分鐘。

5.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）中限制內(nèi)切酶Sac?II酶切反應(yīng)條件如下：37℃酶切2小時。