[發(fā)明專利]一種微生物轉(zhuǎn)化異丁香酚生產(chǎn)香蘭素的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410142056.0
• 申請(qǐng)日: 2014-04-10
• 公開（公告）號(hào): CN103911399A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尹昌樹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川省申聯(lián)生物科技有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12P7/22
• 分類號(hào): C12P7/22;C12R1/07
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及香蘭素的生產(chǎn)方法，具體涉及到一種微生物轉(zhuǎn)化異丁香酚生產(chǎn)香蘭素的方法。

背景技術(shù)

異丁香酚是用于配制香精和制備香蘭素，可用于配制依蘭、肉豆蔻等精油；也可用以配制懸鉤子、桃子、辛香型、丁香型香味的食用香精。是半合成香蘭素的原料。香蘭素，又名香草醛，為一種廣泛使用的可食用香料，可在香莢蘭的種子中找到，也可以人工合成，有濃烈奶香氣息。廣泛運(yùn)用在各種需要增加奶香氣息的調(diào)香食品中，如蛋糕、冷飲、巧克力、糖果；還可用于香皂、牙膏、香水、橡膠、塑料、醫(yī)藥品?，F(xiàn)有的香蘭素生產(chǎn)方法有化學(xué)轉(zhuǎn)化合成和微生物法，如申請(qǐng)?zhí)枮?00510064494.0的發(fā)明專利，公開了微生物轉(zhuǎn)化異丁香酚生產(chǎn)香草醛的菌種和方法，該菌種的生物保藏號(hào)為CGMCC1347，該發(fā)明專利公開了一種轉(zhuǎn)化異丁香酚的微生物以及利用該微生物轉(zhuǎn)化香草醛的方法，在該專利中，所公開的制備方法較為常規(guī)，其轉(zhuǎn)化率等指標(biāo)仍然具有較大的提升空間。

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述不足，本發(fā)明提出了一種新的解決方案。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種微生物轉(zhuǎn)化異丁香酚生產(chǎn)香蘭素的方法。

為達(dá)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：提供一種微生物轉(zhuǎn)化異丁香酚生產(chǎn)香蘭素的方法，選取從土壤中篩選獲取的微生物菌種SW-B9，其能耐受高底物濃度，可將異丁香酚轉(zhuǎn)化為香蘭素，保藏號(hào)為CGMCC1347；菌種在斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后轉(zhuǎn)入種子培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，再加入到發(fā)酵培養(yǎng)液中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，然后加入含有異丁香酚的生物轉(zhuǎn)化底物中進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，在生物轉(zhuǎn)化底物中加入0.03%~0.20%w/v的促進(jìn)劑；所述促進(jìn)劑包括40%~65%的十二烷基硫酸鈉和余量的氯化亞鐵，其中氯化亞鐵的濃度為1mmol/L。

綜上所述，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明公開的利用微生物轉(zhuǎn)化異丁香酚生產(chǎn)香蘭素的方法具有較高的轉(zhuǎn)化率，發(fā)酵液中的目標(biāo)產(chǎn)物的含量增加，減少了發(fā)酵時(shí)間。

具體實(shí)施方式

菌種的選取

從中國北京中關(guān)村中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物保藏中心獲得保藏號(hào)為CGMCC?1347的紡錘芽孢桿菌。

本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例中微生物的培養(yǎng)過程包括以下過程：

斜面培養(yǎng)：將菌種接種到斜面培養(yǎng)基上，斜面培養(yǎng)基為葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。

種子培養(yǎng)：將斜面培養(yǎng)后的菌種接入到25ml的種子培養(yǎng)基內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，種子培養(yǎng)基包括玉米漿1%~10%，磷酸氫鉀0.01%~0.05%，磷酸二氫鉀0.01%~0.5%，硫酸鎂0.01%~0.5%，葡萄糖0.1%~1%，硫酸銨0.1~0.2%和酵母粉0.2%~0.5%。菌種在種子培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件為：溫度38℃，180r/min搖床振蕩培養(yǎng)12小時(shí)，獲得種子培養(yǎng)液。

發(fā)酵培養(yǎng)：發(fā)酵培養(yǎng)基包括玉米漿1%~10%，磷酸氫鉀0.1%~0.5%，硫酸鎂0.1%~0.5%，蛋白胨0.2%~0.5%，氯化鋅0.01%~0.02%。在發(fā)酵培養(yǎng)基中加入種子培養(yǎng)液，并于37℃，pH7.5，180r/min搖床振蕩培養(yǎng)10小時(shí)后加入香蘭素使香蘭素的最終濃度為1mmol/L，作為誘導(dǎo)劑繼續(xù)培養(yǎng)8小時(shí)，最終獲得發(fā)酵培養(yǎng)液。

轉(zhuǎn)化培養(yǎng)：在生物轉(zhuǎn)化底物中加入從發(fā)酵培養(yǎng)液獲取的濕菌體，其中生物轉(zhuǎn)化底物為按照重量計(jì)80%異丁香酚和20%水的混合物，然后在生物轉(zhuǎn)化底物中加入0.03%~0.20%w/v的促進(jìn)劑和8~80g/L的濕菌體，控制發(fā)酵溫度為37℃，pH5~8，轉(zhuǎn)化24~240小時(shí)，同時(shí)每隔12小時(shí)檢測(cè)生物轉(zhuǎn)化底物中異丁香酚的濃度和產(chǎn)物香蘭素的濃度。

實(shí)施例1

取菌種經(jīng)斜面培養(yǎng)和種子培養(yǎng)后進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，其中斜面培養(yǎng)基為葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，種子培養(yǎng)基為包括玉米漿1%，磷酸氫鉀0.01%，磷酸二氫鉀0.01%，硫酸鎂0.01%，葡萄糖0.1%，硫酸銨0.1%和酵母粉0.2%，其余為培養(yǎng)基載體，可以為水；發(fā)酵培養(yǎng)基包括玉米漿1%，磷酸氫鉀0.1%，硫酸鎂0.1%，蛋白胨0.2%，氯化鋅0.01%，其余為培養(yǎng)基載體。

轉(zhuǎn)化培養(yǎng)：在生物轉(zhuǎn)化底物中加入8g/L的濕菌體和0.03%w/v的促進(jìn)劑，其中促進(jìn)劑為按重量計(jì)的40%的十二烷基硫酸鈉和60%的1mmol/L的氯化亞鐵溶液。然后控制發(fā)酵溫度為37℃，pH7，轉(zhuǎn)化72小時(shí)，同時(shí)每隔12小時(shí)檢測(cè)生物轉(zhuǎn)化底物中異丁香酚的濃度和產(chǎn)物香蘭素的濃度。

實(shí)施例2