[發(fā)明專利]產(chǎn)L-丙氨酸且耐受自來水的菌株及構(gòu)建方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410140656.3 | 申請日： | 2014-04-09 |
| 公開（公告）號： | CN103898150A | 公開（公告）日： | 2014-07-02 |
| 發(fā)明（設計）人： | 張學禮;郭恒華;張冬竹 | 申請（專利權(quán)）人： | 安徽華恒生物科技股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N1/21;C12P13/06;C12R1/19;C12R1/10 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢 |
| 地址： | 231131 安徽*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 丙氨酸 耐受 自來水 菌株 構(gòu)建 方法 | ||
1.一種構(gòu)建重組菌的方法，包括如下步驟：將出發(fā)菌染色體上的clpA蛋白編碼基因替換為clpA*蛋白的編碼基因，得到的重組菌；
所述clpA*蛋白的氨基酸序列為將所述clpA蛋白氨基酸序列的第632位異亮氨酸I突變?yōu)榻z氨酸S。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：
所述clpA*蛋白編碼基因為將所述clpA蛋白編碼基因核苷酸序列第1895位的堿基為T突變?yōu)镚得到的基因。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述clpA*蛋白編碼基因的核苷酸序列為序列表中序列2自5’末端第1-2272位核苷酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：
所述將出發(fā)菌染色體上的clpA蛋白編碼基因替換為clpA*蛋白編碼基因為將含有所述clpA*蛋白編碼基因的DNA片段Ⅱ同源重組到所述出發(fā)菌中。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：
所述DNA片段Ⅱ的核苷酸序列為序列表中序列2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述出發(fā)菌為通過將嗜熱脂肪地芽孢桿菌染色體上的L-丙氨酸脫氫酶基因整合在大腸桿菌ATCC8739染色體的乳酸脫氫酶處，再依次敲除所得大腸桿菌染色體的丙酮酸甲酸裂解酶基因、乙醇脫氫酶基因、乙酸激酶基因、富馬酸還原酶基因和丙氨酸消旋酶基因，然后在發(fā)酵罐中連續(xù)傳代培養(yǎng)而得的基因工程菌；
所述出發(fā)菌具體為大腸桿菌XZ-A26CGMCC?No.4036。
7.由權(quán)利要求1-6中任一所述的方法制備的重組菌。
8.權(quán)利要求7所述的重組菌在產(chǎn)生和/或提高L-丙氨酸中的應用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應用，其特征在于：所述產(chǎn)生和/或提高L-丙氨酸為將權(quán)利要求7所述的重組菌在自來水作為溶劑配制的發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵生成。
10.一種產(chǎn)生L-丙氨酸的方法，其特征在于：在自來水作為溶劑配制的發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵權(quán)利要求7所述的重組菌，收集發(fā)酵產(chǎn)物，即得到L-丙氨酸。
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