[發(fā)明專利]核酸探針及其制備方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410140110.8
• 申請日: 2014-04-09
• 公開（公告）號: CN104099410A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發(fā)明（設計）人: 蔣宇揚
• 申請（專利權）人: 清華大學深圳研究生院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C40B40/06
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

優(yōu)先權信息?

本申請請求2013年04月10日向中國國家知識產權局提交的、專利申請?zhí)枮?01310123604.0的專利申請的優(yōu)先權和權益，并且通過參照將其全文并入此處。?

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域，具體的，涉及核酸探針及其制備方法和用途，更具體的，本發(fā)明涉及一種核酸探針、一種核酸探針文庫、一種篩選核酸探針的方法、利用該方法篩選獲得的核酸探針、一種篩選疾病標志物的方法、一種確定樣品中存在預定靶標的方法、以及一種用于確定樣品中存在預定靶標的試劑盒。?

背景技術

早期診斷和治療是提高癌癥患者生存率的關鍵。目前癌癥早期診斷主要是通過檢測血清中腫瘤生物標志物，分為單項檢測和聯(lián)合檢測腫瘤標志物等方法。單項檢測腫瘤標志物存在診斷陽性率不高，特異性不強的局限性。聯(lián)合檢測血清腫瘤標志物明顯提高了診斷的有效率和靈敏度，但聯(lián)合檢測項目過于繁雜亦不便使用。要發(fā)現(xiàn)一種或幾種標志物，并同時檢測這些標志物工作量更大，周期也更長。建立新穎的高通量腫瘤細胞檢測技術，開發(fā)快速、靈敏、準確的腫瘤檢測試劑盒是亟待解決的重大問題之一。?

然而，目前用于診斷腫瘤的手段仍有待改進。?

發(fā)明內容

本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決上述技術問題之一或至少提供一種有用的商業(yè)選擇。為此，本發(fā)明的一個目的在于提出一種能夠有效用于檢測靶標的核酸探針、制備該核酸探針的方法以及利用該核酸探針進行檢測的方法。?

在本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種核酸探針。根據本發(fā)明的實施例，該核酸探針包括：第一核酸分子，所述第一核酸分子能夠與靶標特異性相互作用，并且所述第一核酸分子在與靶標特異性相互作用后展現(xiàn)出催化活性；以及底物分子，所述底物分子與所述第一核酸分子相連，并且所述底物分子僅在所述第一核酸分子的催化活性作用下，能夠產生可檢測信號。利用根據本發(fā)明實施例的核酸探針，因為第一核酸分子能夠展現(xiàn)出催化活性，尤其是在第一核酸分子與外界物質接觸時，其所展現(xiàn)出的催化活性可能會受到變化。并且由于底物分子在第一核酸分子的催化活性作用下，能夠產生可檢測信號。因而，通過對核酸探針是否產生可檢測信號來判斷該核酸探針是否接觸了預定的靶標物質。由此，利用該探針能夠有效地對預定的靶標物質進行檢測。?

根據本發(fā)明的實施例，該核酸探針還可以進一步具有下列附加技術特征：?

在本發(fā)明的一個實施例中，所述第一核酸分子包括：識別序列，所述識別序列能夠識別靶標；第二核酸分子和第三核酸分子，所述第二核酸分子和第三核酸分子分別與所述識別序列的5’末端和3’末端相連。由此，通過固定第二核酸分子和第三核酸分子的序列，可以有效地對識別序列進行擴增，并且進一步可以有效地通過常用的手段，制備所需要的核酸探針。?

在本發(fā)明的一個實施例中，所述識別序列的長度為10-100nt，優(yōu)選為20-80nt，進一步優(yōu)選為25-65nt，進一步優(yōu)選為30-50nt，最優(yōu)選為35-45nt。由此，可以進一步提高識別序列識別靶標的效率。?

在本發(fā)明的一個實施例中，所述識別序列為選自下列的至少之一：?

（a）SEQ?ID?NO：1～38的至少之一所示的核酸序列；?

（b）SEQ?ID?NO：1～38的至少之一所示的核酸序列的一部分；?

（c）與（a）或（b）中所示核酸序列具有至少80%，優(yōu)選至少90%，更優(yōu)選至少95%，進一步優(yōu)選至少99%序列同一性的核酸序列。?

由此，可以利用該核酸探針對癌癥例如乳腺癌進行有效的檢測。?

在本發(fā)明的一個實施例中，所述識別序列包含TTAGCG的核酸單元。由此，可以利用該核酸探針對乳腺癌進行有效的檢測。?

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述識別序列為SEQ?ID?NO：9所示的核酸序列。由此，該核酸探針對乳腺癌的特異性好，從而可以利用該核酸探針對乳腺癌進行有效的檢測。?

在本發(fā)明的一個實施例中，所述第二核酸分子具有SEQ?ID?NO：39所示的核酸序列，第三核酸分子具有SEQ?ID?NO：40所示的核酸序列。由此，可以進一步提高利用第二核酸分子和第三核酸分子對識別序列進行擴增的效率。?