[發明專利]抗HER2的多克隆抗體及其制備和應用

無效

• 申請號: 201410139514.5
• 申請日: 2014-04-09
• 公開（公告）號: CN103910800A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發明（設計）人: 畢愛國;劉誠;周冬冬
• 申請（專利權）人: 杭州雅盛生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K16/02;G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 高文迪

1.一種抗HER2的多克隆抗體，其特征在于，其制備方法如下：

（a）免疫原的制備

通過基因克隆和原核表達HER2蛋白，并通過包涵體破碎得到部分可溶蛋白，再經過親和層析純化得到HER2蛋白；

首次免疫用弗氏完全佐劑，以后的加強免疫用弗氏不完全佐劑；

（b）蛋雞免疫

取剛開始產蛋的蛋雞進行免疫，一共進行4次，每次間隔15天；

（c）免疫效果監測

免疫后由雞翅下取血，分離血清進行ELISA血清效價檢測，與免疫前雞血清進行比較，收集免疫后比免疫前血清效價提高6～8倍的雞蛋；

（d）IgY提取與分離

分離蛋黃，粗提IgY，超濾濃縮后采用沉淀法沉淀IgY，離心取沉淀，PBS復溶后備用；

（e）IgY純化

將經過步驟（d）處理后的IgY采用疏水層析法進行層析純化，線性梯度洗脫，收集單峰即為IgY抗體，純度大于98%以上。

2.根據權利要求1所述的一種抗HER2的多克隆抗體，其特征在于，所述（a）中按每只雞200μgHER2蛋白免疫量計算，將HER2與佐劑按1:1的比例混合，并完全乳化。

3.根據權利要求1所述的一種抗HER2的多克隆抗體，其特征在于，所述的抗HER2的多克隆抗體在制備用于檢測HER2蛋白的免疫檢測工具中的應用。

4.根據權利要求3所述的一種抗HER2的多克隆抗體，其特征在于，所述免疫檢測工具為試劑盒、芯片或試紙。

5.根據權利要求1所述的一種抗HER2的多克隆抗體，其特征在于，所述的抗HER2的多克隆抗體在制備用于診斷HER2過度表達產生的惡性腫瘤的試劑盒中的應用。

6.一種用于檢測HER2抗原的免疫組化試劑盒，包含權利要求1所述的IgY多克隆抗體、其保守性突變體或其活性片段。