[發明專利]用于檢測等位基因CYP2C19*2的引物組合及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201410136619.5
• 申請日: 2014-04-04
• 公開（公告）號: CN103923988A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 宋競巖
• 申請（專利權）人: 宋競巖
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體地說，涉及一種用于檢測等位基因CYP2C19*2的引物組合及檢測試劑盒。

背景技術

CYP2C19基因存在多種等位基因，包括*1、*2、*3……*17等。其中，具有正常酶活性的等位基因是CYP2C19*1，而CYP2C19*2和CYP2C19*3等位基因編碼的酶無活性。由CYP2C19*2和CYP2C19*3導致的藥物慢代謝占東方人慢代謝的99%，因此CYP2C19*2和CYP2C19*3的檢測技術日益受到重視。患者如果為*1/*1則屬于快代謝型；如果為*1/*2或*1/*3則屬于中代謝型；如果為*2*2或*2/*3或*3/*3則屬于慢代謝型。通過檢測CYP2C19的G681A變異可以鑒定CYP2C19*2等位基因，通過檢測CYP2C19的G636A變異可以鑒定CYP2C19*3等位基因。

CYP2C19基因型與個體化用藥：

1）CYP2CI9基因型與氯吡格雷抵抗：氯吡格雷（波立維）是目前世界范圍內使用最廣泛的噻吩吡啶類抗血小板藥，用于急性冠脈綜合征、冠脈支架術和冠心病的一級、二級預防，可以減少心血管疾病患者心臟病發作、卒中以及死亡的風險。氯吡格雷是一種前體藥物，在體外無活性，口服后必須在體內經肝臟細胞色素P450代謝為有效活性產物才能發揮其抗血小板聚集的作用。美國FDA發布警告稱，藥師可以通過檢測CYP2C19的基因型來了解患者波立維的代謝能力，對于波立維慢代謝者可以增加藥量或者選用其它抗凝血藥物。

2）CYP2C19基因型與苯妥英血藥濃度關系：苯妥英(phenytoin，PHT)是臨床上常用的抗癲癇藥物，具有親脂性，進入人體后經I相反應進行生物轉化后，由腎臟和肝臟排出體外。苯妥英代謝受CYP2C9和CYP2C19基因調控。研究結果顯示，CYP2C19*2和CYP2C19*3與苯妥英的代謝缺陷關系密切，是苯妥英的關鍵代謝酶。檢測CYP2C19基因型能夠指導苯妥英服用劑量。

3）CYP2C19基因型與奧美拉唑臨床療效相關性：質子泵抑制藥(PPIs)體內主要經CYP2C19代謝，其次是CYP3A4代謝。通過對CYP2C19基因型與奧美拉唑臨床療效的研究發現，奧美拉唑合用阿莫西林等抗生素治療幽門螺旋桿菌感染性消化道潰瘍患者，慢代謝和中間代謝患者愈合率明顯高于快代謝患者。

4）CYP2C19基因型與伏立康唑：伏立康唑是一種廣譜的三唑類抗真菌藥，與目前國內市場上的抗真菌藥相比，具有高效低毒的特點。伏立康唑通過細胞色素P450同工酶代謝，包括CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4。這些酶的抑制劑或誘導劑可以分別增高或降低伏立康唑的血液濃度。伏立康唑進入人體后，快代謝患者與慢代謝患者血液濃度差異顯著，慢代謝患者使用常規劑量可能出現毒副反應，此時應考慮減小劑量；快代謝和中間代謝患者應考慮給予常規劑量，根據療效小幅增、減劑量；給予常規劑量，若快代謝患者出現毒副反應或慢代謝患者療效不佳時，均應考慮換藥。

G681A位點上、下游序列特征分析：

AATTACAACCAGAGCTTGGCATATTGTATCTATACCTTTATTAAATGCTTTTAATTTAATAAATTATTGTTTTCTCTTAGATATGCAATAATTTTCCCACTATCATTGATTATTTCCCG/AGGAACCCATAACAAATTACTTAAAAACCTTGCTTTTATGGAAAGTGATATTTTGGAGAAAGTAAAAGAACACCAAGAATCGATGGACATCAACAACCCTCGGGACTTTATTGATTGCTTCCTGATCAAAATGGAGAAG

G681A位點上、下游序列如上所述。其中下劃線表示G681A位點。而粗體表示另一個SNP位點。由于該SNP位點緊鄰G681A位點，造成G681A位點基因分型的困難。

目前已建立了多種G681A基因分型的方法，分述如下：

1、直接測序法：該方法是基因分型的金標準。但是該方法涉及基因特異擴增和測序反應兩個步驟。不但成本高，耗時長，而且由于需要進行擴增后的處理，容易造成樣本的污染。不適合在臨床開展。

2、焦磷酸測序法：該方法同樣是基因分型的金標準，與直接測序法具有相同的缺點。