[發明專利]測定柴胡皂苷a含量的時間分辨熒光免疫分析法及試劑盒

無效

• 申請號: 201410134008.7
• 申請日: 2014-04-03
• 公開（公告）號: CN103884844A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 晁志;崔倩
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/64
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

1.一種測定柴胡皂苷a含量的時間分辨熒光免疫分析法，其特征在于，以兔抗鼠IgG包被96孔酶標反應板，與樣品中的柴胡皂苷a競爭結合抗柴胡皂苷a的單抗，用稀土離子Eu³⁺標記SSa-HSA復合物作為示蹤物，以增強液作為發光增強系統，利用間接競爭時間分辨熒光免疫分析法，測定所述樣品中的柴胡皂苷a含量。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)以兔抗鼠IgG包被96孔酶標板，4℃反應過夜；

(2)常溫振蕩，洗滌液清洗，常溫封閉，清洗，拍干；

(3)配制柴胡皂苷a標準品或待測樣品，溶劑為20％甲醇水，每孔加入標準品或待測樣品，濃度分別為0ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、250ng/ml，2000ng/ml、5000ng/ml；再加入以稀釋緩沖液1∶4000倍稀釋的抗柴胡皂苷a皂苷單克隆抗體溶液和1∶800倍稀釋的標記抗原復合物，貼封膜，常溫下振蕩反應；

(4)清洗，拍干，加入增強液，振蕩后，用熒光免疫分析儀Victor1420測定其熒光信號；

(5)測得標準品的熒光值，建立標準曲線；測得待測樣品的熒光值即得為樣品的柴胡皂苷a含量。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法以稀土離子Eu³⁺標記SSa-HSA復合物作為示蹤物，并用增強-解離系統擴大熒光信號。

4.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法的檢測靈敏度為0.006ug/ml。

5.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法的含量檢測范圍為10-5000ng/ml。

6.一種試劑盒，用于測定柴胡皂苷a含量的時間分辨熒光免疫分析方法，其特征在于，包括：酶標包被板，標準品，抗柴胡皂苷a單克隆抗體，銪標記復合物，洗滌液，稀釋液，增強液。

7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述標準品的濃度分別為0ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、250ng/ml，2000ng/ml、5000ng/ml，加樣量25ul/孔；測定前，以稀釋液將抗柴胡皂苷a單克隆抗體4000倍和銪標記復合物800倍稀釋，按先后順序加入100ul/孔；增強液的加液量為200ul/孔。