[發明專利]狂犬病病毒CTN-1株對原代雞胚成纖維細胞的適應方法

有效

• 申請號: 201410131925.X
• 申請日: 2014-04-03
• 公開（公告）號: CN103865888A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 郭采平;王春華;羅姍;劉永娣;容偉華;李慧;周維;周蘭貞;田華;張佩;丁玉江;黃偉榮;吳開永;張運佳;王紅冰;王錦才;吳恩應
• 申請（專利權）人: 深圳市衛光生物制品股份有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/205;A61P31/14
• 代理公司: 深圳市中知專利商標代理有限公司 44101
• 代理人: 孫皓;林虹

技術領域

本發明涉及狂犬病疫苗領域，具體涉及將狂犬病病毒CTN-1株適應于原代雞胚成纖維細胞的方法。

背景技術

狂犬病病毒（Rabies?virus，RV）是高度嗜神經病毒，為彈狀病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒屬（Lyssavirus?genus）中不分節段的單股負鏈RNA病毒，能引起人獸共患的世界性傳染病—狂犬病。據報道全世界每年因狂犬病的死亡人數約有5.5萬例,實際死亡人數應明顯高于該統計數字（http://www.worldrabiesday.org/）。目前除日本、英國、夏威夷等少數國家和地區沒有狂犬病發生以外,該病呈世界性分布。亞洲和非洲是人狂犬病發生最嚴重的地區,占全世界死亡總人數的99%。在正式報告狂犬病的國家中,印度每年有3萬人以上死于狂犬病,居首位；我國近20年每年統計到的死亡人數超過3000例,居第二位(Yunpeng?wang?et?al.,2012.Journal?of?Applied?Virology.1:10-19)。目前尚無法醫治狂犬病，疫苗接種免疫是預防狂犬病的唯一有效途徑。

狂犬病疫苗是由滅活或減毒的RV制備。由于RV是嗜神經性病毒，幾乎對所有哺乳動物的神經組織都具有侵染性。世界上首次試用的狂犬病疫苗就是用RV感染兔脊髓研制的，以后經兔腦、小鼠腦、羊腦等動物神經組織培養，制備疫苗。但由于該類疫苗效力低且存在嚴重的變態反應而被WHO停用（林放濤等.1992.狂犬病學.203-221;Meslin?F.X.et.al.,1996.Laboratory?techniques?in?rabies.4^th?ed.WHO.223-313）。1958年Kissling等將RV街毒株和固定毒株在原代地鼠腎細胞中傳代（Kissing?P.E.et?al.,1958.Proc.Soc?Exp?Biol?Med.98:223-225）。20世紀60年代以后用細胞制備疫苗有了很大發展，人們開始利用各種細胞來大規模生產狂犬病疫苗，特別是人二倍體細胞培養疫苗（HDCV）的研制（Wiktor?etal.,1964.J?Immunol.93:353-366）。由于不存在神經元組織，與之前的腦組織疫苗相比，組織培養疫苗不僅更安全，而且更有效。目前已批準若干種組織培養疫苗，其具有與HDCV相當的療效和安全性,例如純化雞胚細胞疫苗（PCEC）（Barth?et?al.,1984.J?BiolStand.12:29-64;Schgal?et?al.,1993.J.Commun.Dis.27:36-43）和純化vero細胞狂犬病疫苗（PVRV）(Suntharasamal?et?al.,1986.Lancet.2:129-131)。

RV?CTN-1株是WHO和我國有關部門批準用于疫苗生產的毒株，由中國食品藥品檢定研究院建株和保存。20世紀80年代李宏玲等將RV?CTN-1株在vero細胞中培養進行適應傳代，得到較高滴度的CTN?vero細胞適應株，可用于疫苗生產（李宏玲等.1989.生物制品學雜志.2:22-25）。董關木等進一步證實RV?CTN-1株可在vero細胞內快速適應，滴度可到7.0logLD₅₀/ml以上，并可多次收獲病毒培養液（董關木等.1995.微生物學免疫學進展.23:82-85）。目前已有多家生產單位應用RV?CTN-1株生產vero細胞疫苗并取得生產文號和投產（俞永新.2008.狂犬病和狂犬病疫苗.第二版:192-208）。但vero細胞基質為永生性傳代細胞系，因此有必要檢測終產品中的細胞殘留DNA（Ref.歐洲藥典.2004.中國藥典.2010），因為其可能具有傳遞潛伏病毒和其他物質的風險。WHO也規定人用制品的殘留DNA劑量應不超過10ng（WHO?Expert?Committee?on?Biological?Standardition.Recommendations?inactivated?rabies?vaccine?for?human?use?produced?in?cell?substrates?andembryonated?eggs.Genava.WHO.2005）。