[發明專利]從豬血中分離純化纖維連接蛋白的生產工藝

在審

• 申請號: 201410120015.1
• 申請日: 2014-03-27
• 公開（公告）號: CN104945495A
• 公開（公告）日: 2015-09-30
• 發明（設計）人: 董浩;張秀民;胡瑞天;陸銀勝;羅志良;王雅靜;高振宏;程榆茗
• 申請（專利權）人: 安徽寶迪肉類食品有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 董一寧

1.一種從豬血中分離純化纖維連接蛋白的生產工藝，其特征在于：包括如下步驟：

①從全血中分離出血漿和血細胞；

②鹽析：向上層血漿中加入酸性Na₂HPO₄-NaH₂PO₄緩沖液并充分混勻，然后邊攪拌邊加入硫酸銨，使其飽和度達到20%，并調節pH至堿性，然后放入冰箱冷藏1.5-2.5h使之充分沉淀，最后再經離心所得沉淀主要成分即為纖維連接蛋白；

③透析除鹽：將②步沉淀溶于酸性PBS緩沖液中,裝入透析袋內進行透析,每8-10h換一次透析液,直至用10%BaCl₂檢測無SO₄^2-為止，收集透析袋內液體進行濃縮操作，即得纖維連接蛋白粗品；

④純化：先用Tris-HCl緩沖液作為平衡液、堿性TB緩沖液作為洗脫液,將③步所得纖維連接蛋白粗品上樣于明膠Sepharose-4B柱進行親和層析，用TB緩沖液將不吸附部分洗脫，然后用6mol/L尿素洗脫纖維連接蛋白，收集洗脫液，合并洗脫液，用TB緩沖液進行透析除去尿素，透析后濃縮即得纖維連接蛋白純品。

2.根據權利要求1所述的從豬血中分離純化纖維連接蛋白的生產工藝，其特征在于：上述步驟②Na₂HPO₄-NaH₂PO₄緩沖液的pH=6.3，并且Na₂HPO₄-NaH₂PO₄緩沖液的加入量與上層血漿等體積。

3.根據權利要求1所述的從豬血中分離純化纖維連接蛋白的生產工藝，其特征在于：上述步驟②中Na₂HPO₄-NaH₂PO₄緩沖液的濃度為0.0175mol/L。

4.根據權利要求1所述的從豬血中分離純化纖維連接蛋白的生產工藝，其特征在于：上述步驟②中離心的速度為3000r/min，時間為15min。

5.根據權利要求1所述的從豬血中分離純化纖維連接蛋白的生產工藝，其特征在于：上述步驟③中PBS緩沖液的pH=6.3。

6.根據權利要求1所述的從豬血中分離純化纖維連接蛋白的生產工藝，其特征在于：上述步驟④中TB緩沖液的濃度為0.05mol/L，pH=7.5；Tris-HCl緩沖液中含5mmol/L苯脒。