[發明專利]一種德氏有孢圓酵母及其應用

有效

• 申請號: 201410112194.4
• 申請日: 2014-03-24
• 公開（公告）號: CN104312931B
• 公開（公告）日: 2017-01-25
• 發明（設計）人: 馬忠友;祝嫦巍;李正鵬;胡慶森;汪建飛;趙建榮
• 申請（專利權）人: 安徽科技學院
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12N9/16;C12N15/55;A23K20/189;C12R1/645
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所31251
• 代理人: 王法男

技術領域

本發明涉及酵母突變菌株及其應用，具體涉及一種產高催化活性植酸酶的德氏有孢圓酵母突變菌株及其應用。?

背景技術

植酸（Phytic?acid)又稱肌醇六磷酸，含有6個磷酸基團，是飼料中磷的重要貯存形式。磷是動物機體必須的礦物元素，而單胃動物體內缺乏分解植酸的植酸酶（Phytase，催化植酸及植酸鹽水解的酶），造成飼料中磷的利用率僅有1/3或更低。為了補充有效磷的不足，必須在飼料中添加無機磷酸鹽，常用的為磷酸氫鈣和骨粉。這樣不僅大大增加了飼料的成本，而且大量的植酸磷不能被利用而直接排出體外，造成磷源的浪費及嚴重的環境問題。?

研究表明，在飼料中添加植酸酶可以提高植物性飼料中磷和其他礦物元素的利用率，提高對淀粉、脂肪、蛋白質等營養物質的利用率，從而促進動物健康快速的增長，減少糞便中磷含量從而減輕環境的污染。一般情況下，在飼料中添加植酸酶可以使磷的利用率提高20-60％。在玉米-豆粕日糧中添加微生物植酸酶，磷的利用率提高60％。在以豆餅為基礎的肉雞飼料中添加植酸酶，大約有50％的植酸磷被釋放。?

提高豬飼料中植酸酶的水解活性，主要是要提高豬用植酸酶在胃環境下的植酸水解能力，其中提高植酸酶在酸性環境下的穩定性和催化活性是重點。因此，優化酵母菌植酸酶，使其在整個酸性范圍內具有高催化活性，具有很大的應用潛力和產業價值。隨著生物科技的發展，特別是DNA重組技術的應用，使各種微生物來源的植酸酶基因的大規模表達成為可能。目前來源于Escherichia?coli，Aspergillus?niger，A.fumigatus等微生物的植酸酶已經在巴斯德畢赤酵母中得到高效表達，并成功地在飼料中應用。然而大多數植酸酶活性的最適pH為4.5到5，在pH2到3?時，酶活性比較低，只有最適pH條件下的30-40％，不利于植酸酶在胃環境中發揮水解植酸的作用。?

發明內容

本發明的目的在于，提供一種德氏有孢圓酵母(Torulaspora?delbrueckii)，該突變菌株能夠產生一種具有高催化活性的突變植酸酶，該突變菌株在pH2.5-5.5范圍內均具有催化活性。解決了現有技術中植酸酶在酸性條件下活性較低的技術問題。?

為實現本發明的目的，本發明提供一種德氏有孢圓酵母(Torulaspora?delbrueckii)，其保藏編號為：CGMCC?No.8740。于2014年01月17日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵政編碼為100101)。?

進一步地，本發明提供一種所述德氏有孢圓酵母CGMCC?No.8740在制備突變植酸酶PHY-M中的應用。?

所述制備的突變植酸酶PHY-M在pH2.5-5.5范圍內具有催化活性。?

進一步地，本發明提供一種突變植酸酶PHY-M，所述突變植酸酶PHY-M的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。所述突變植酸酶PHY-M發生突變的位點為，第48位的Ala突變為Thr，第391位的Cys突變為Arg。?

本發明還提供一種編碼突變植酸酶PHY-M的基因phy-m，所述基因phy-m的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。?

進一步地，所述基因phy-m能夠用于克隆到原核或真核生物基因表達載體上，通過基因工程技術構建基因工程菌株或轉基因植物，以高效表達植酸酶基因phy-m生產突變植酸酶PHY-M。?

本發明還提供一種突變植酸酶PHY-M在飼料添加劑中的應用。所述飼料添加劑的有效成分為所述突變植酸酶PHY-M對應的核苷酸序列，或者表達所述突變植酸酶PHY-M的宿主細胞。?

本發明的有益效果在于：本發明提供的保藏的菌株CGMCC?No.8740，菌株性能穩定；利用該菌株發酵得到高催化活性的突變植酸酶PHY-M，該突變植酸酶PHY-M在pH2.5-5.5范圍內均具有很好的催化活性，?使其在胃環境條件下能夠更好地發揮水解植酸的作用。?

具體實施方式

以下通過具體實施例來說明本發明的技術方案。?

實驗材料和試劑：?

1、菌株?

德氏有孢圓酵母（Torulaspora?delbrueckii），保藏編號為：CGMCCNo.8742。?

2、酶類及其他生化試劑?