[發明專利]一種乳腺癌循環腫瘤細胞檢測系統及試劑盒

有效

• 申請號: 201410108435.8
• 申請日: 2014-03-21
• 公開（公告）號: CN103940997B
• 公開（公告）日: 2017-01-04
• 發明（設計）人: 沈鶴柏;梁曉飛
• 申請（專利權）人: 上海柏慧康生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/532
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所31233
• 代理人: 黃志達

技術領域

本發明屬于乳腺癌循環腫瘤細胞檢測領域，特別涉及一種乳腺癌循環腫瘤細胞檢測系統及試劑盒。

背景技術

癌癥是困擾人類生活的幾大疾病之一，現在平均每年癌癥發病率在22%左右；然而，目前的醫療設施所檢測到的癌癥大多都屬于中晚期，發現的比較晚而此時的癌細胞已基本擴散，藥物難以治療。戰勝癌癥最重要的是早發現，早期癌癥大都可以治愈。最初癌腫瘤細胞的無序生長使其失去了相互黏附的能力，松散的腫瘤細胞可以進入血管和淋巴管，進入血液循環或淋巴循環，通過血液循環實現轉移的細胞稱之為循環腫瘤細胞(circulating?tumor?cells；CTCs)。腫瘤發生轉移的早期，循環腫瘤細胞(CTCs)可以沿循環系統種植于遠處器官，逐漸形成轉移灶。但是使用現有的、常規的、經驗性的診斷手段卻無法“看到”這樣轉移過程。因此，研究發展一種新的可以檢測轉移腫瘤細胞的方法是非常有必要的。乳腺癌細胞存在于人的乳腺中，相對于其它體內癌細胞更容易受到外在的機械作用力從而也更容易脫落形成循環腫瘤細胞；進而用特異性免疫磁性微球去捕獲早期乳腺癌循環腫瘤細胞進行早期檢測相對于其它癌癥的早期檢測更方便、準確。

通常檢測血液中的CTCs的方法有兩種，其中一種方法是采用磁性細胞分選技術，其原理是先將特異性抗體包被在有同源二抗的磁珠上制成免疫磁性微球，再與靶細胞上的抗原結合成“靶細胞-抗原抗體-磁球”復合物，該復合物具有磁響應性，在外加磁場的作用下向一定方向移動，靶細胞得到富集，采用陽性篩選和陰性篩選結合的方法分選出靶細胞。另一種方法是采用免疫細胞化學技術，其原理是利用抗原與抗體特異性結合的特點，使染色劑（熒光素、酶等）標記的抗體與特異性的腫瘤標志物（主要包括上皮細胞角蛋白CK、上皮細胞膜特異性抗原等）結合，通過酶和底物反應顯色或其他顯色方法來判斷腫瘤細胞的存在，再由檢測人員在顯微鏡下進行腫瘤細胞統計。

檢測血液中的CTCs可分為以下兩個步驟，（1）盡可能多的從患者的外周血中捕獲CTCs；（2）盡可能的動用現有的臨床檢測方法對捕獲的腫瘤細胞進行個體化分析。由于腫瘤細胞往往處于去分化狀態，循環中的腫瘤細胞常也是高度異質性的，而一些變異的腫瘤細胞往往由于捕獲系統的低特異性和低效性而逃脫掉捕，從而出現漏網現象，并得到假陰性結果，導致錯誤的診斷。因此，CTCs檢測系統存在的主要問題為如何發展一種高效并具有高特異性的循環血腫瘤細胞捕獲材料及檢測系統。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種乳腺癌循環腫瘤細胞檢測系統及試劑盒，本發明結合了磁性細胞分選技術和免疫細胞化學技術，更為準確的進行循環腫瘤細胞檢測。

本發明的一種乳腺癌循環腫瘤細胞檢測系統，包括：

乳腺癌循環腫瘤細胞捕獲系統、磁分選裝置和分析計數系統；

所述的乳腺癌循環腫瘤細胞捕獲系統用于對樣本血液進行免疫磁性細胞捕獲、富集和對富集的靶細胞進行熒光染色；所述的乳腺癌循環腫瘤細胞捕獲系統包括功能性富集盒、免疫磁性微球、細胞孵育裝置和熒光染色劑；

所述的磁分選裝置用于富集熒光染色后的靶細胞；

所述的分析計數系統包含熒光顯微鏡和高通量細胞影像分析儀，所述的高通量細胞影像分析儀通過連續掃描熒光顯微鏡下圖像，自動分析產生數據。

所述的循環腫瘤細胞檢測儀器還設置有計算機接口，通過計算機對分析計數系統進行控制。

所述的免疫磁性微球的粒徑范圍為0.1～10微米，免疫磁性微球表面活性物為單一抗-Epcam抗體、葉酸、抗-丙酮酸激酶抗體中的一種或兩種。

所述的功能性富集盒為四方結構，其體積為0.1cm³～1.0m³，其中一面使用活性物修飾，所用活性物為抗-Epcam抗體、葉酸、抗-丙酮酸激酶抗體中的一種或兩種，示意圖見圖2。

本發明的一種乳腺癌循環腫瘤細胞檢測試劑盒，包括：免疫磁性微球和熒光染色劑；所述的免疫磁性微球的表面活性物為單一抗-Epcam抗體、葉酸、抗-丙酮酸激酶抗體中的一種或兩種。

所述的熒光染色劑為含有DAPI和FITC標記的CK蛋白染色劑。

所述的免疫磁性微球的粒徑范圍為0.1～10微米。

有益效果

（1）本發明結合磁性細胞分選技術和免疫細胞化學技術進行循環腫瘤細胞的富集和檢測，通過分析計數系統對腫瘤細胞進行分析、計數，并實現對循環腫瘤細胞在分子及基因方面的分析，結果可靠性高；