[發(fā)明專(zhuān)利]一種快速測(cè)定靈芝產(chǎn)品中多糖肽的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410105731.2
• 申請(qǐng)日: 2014-03-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103884789A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林冬梅;黃宏南;王賽貞;羅虹建;林占熺;林樹(shù)錢(qián)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥材分析領(lǐng)域，具體涉及采用HPLC-ELSD法快速測(cè)定靈芝產(chǎn)品中多糖肽的方法。

背景技術(shù)

靈芝是擔(dān)子菌綱多孔菌科靈芝屬真菌，為滋補(bǔ)強(qiáng)壯、扶正固本的珍品，已有悠久的藥用歷史。現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的應(yīng)用使靈芝的研究更加深入，更進(jìn)一步證明靈芝及其有效成分具有廣泛的藥理作用，可防治慢性支氣管炎、神經(jīng)衰弱、高血脂癥、冠心病、肝炎、白細(xì)胞減少、腫瘤等疾病。靈芝多糖肽作為靈芝的有效成分之一，是從靈芝子實(shí)體中經(jīng)水提取-柱層分離得到的多種糖肽，其中包含有GL-PPT2、GL-PPT3和GL-PPT4三種多糖肽。現(xiàn)代研究表明，靈芝多糖肽具有提高免疫力、抗氧化、抗腫瘤、抗輻射、安神、降血糖、消除放化療副反應(yīng)、除胃熱、保肝解毒等功效。目前對(duì)于多糖肽的檢測(cè)僅有陳穎等人報(bào)道的FoLin-酚法（陳穎,?王賽貞,?林樹(shù)錢(qián).?用FoLin-酚法測(cè)定靈芝產(chǎn)品中多糖肽含量[J].?海峽藥學(xué),?2007,?19(7):?37-39.），具體操作為在1mL樣品中加入堿性銅試液1.0?mL，室溫放置10min，加入4mL?FoLin-酚試液，55℃水浴5min，冷卻至室溫，在750nm測(cè)定吸光值，但此法試劑配制繁瑣，檢測(cè)結(jié)果不夠穩(wěn)定。

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的工作原理是恒定流速的高效液相洗脫液進(jìn)入檢測(cè)器后，先被高壓氣流霧化，霧化形成的小液滴進(jìn)入蒸發(fā)室（漂移管），流動(dòng)相及低沸點(diǎn)的組分被蒸發(fā)，剩下高沸點(diǎn)組分的小液滴進(jìn)入散色池，光束穿過(guò)散色池被散射，散射光被光電管接收形成電信號(hào)，電信號(hào)通過(guò)放大電路、模數(shù)轉(zhuǎn)換電路、計(jì)算機(jī)成為色譜工作站的數(shù)字信號(hào)——色譜圖，即獲得待測(cè)組分的液相色譜。因此可以根據(jù)目標(biāo)物的色譜保留時(shí)間、色譜峰面積與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保留時(shí)間、色譜峰面積的比較，對(duì)化合物進(jìn)行定性、定量測(cè)定。本發(fā)明采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，對(duì)經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單提取后的靈芝產(chǎn)品中多糖肽的含量進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定結(jié)果重現(xiàn)性好，穩(wěn)定準(zhǔn)確可靠。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種高靈敏、簡(jiǎn)便快速測(cè)定靈芝產(chǎn)品中多糖肽的方法，是通過(guò)高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（HPLC-ELSD)對(duì)樣品進(jìn)行定性、定量分析，本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，為靈芝產(chǎn)品中的品質(zhì)評(píng)價(jià)及質(zhì)量控制提供了一種有效、可靠的方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種快速測(cè)定靈芝產(chǎn)品中多糖肽的方法，是采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器對(duì)靈芝產(chǎn)品中多糖肽的含量進(jìn)行快速檢測(cè)。

具體檢測(cè)方法如下：

1）高效液相色譜條件

液相條件：色譜柱為T(mén)SK4000PW（7.8?mm×30?cm）；流動(dòng)相為甲醇：水=20：80；流速為1?mL/min；柱溫為35℃；進(jìn)樣量為10μL；

2）蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)條件

漂移管溫度為55?℃；噴霧器為加熱模式；氣體壓力為45?psi；

3）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制

精密稱(chēng)取干燥的多糖肽對(duì)照品0.0500?g于10?mL容量瓶中，用水溶解并定容，得濃度為5.00?mg/mL的多糖肽對(duì)照品儲(chǔ)備液；臨用前，分別取100?μL、200?μL、300?μL、400?μL、500?μL于5?mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，得濃度分別為100.0、200.0、300.0、400.0、500.0?μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得到濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；

4）樣品處理

稱(chēng)取靈芝產(chǎn)品1-2?g，加水40?mL后于60?℃水浴提取30?min，冷卻，定容至50?mL；過(guò)濾，取濾液2?mL，加6?mL無(wú)水乙醇，混勻，于10000?rpm離心15?min，沉淀用流動(dòng)相溶解，過(guò)0.22?μm有機(jī)濾膜后得樣品溶液備用；

5）樣品含量測(cè)定

吸取樣品溶液進(jìn)行測(cè)定后，根據(jù)濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得出的線(xiàn)性方程，將多糖肽的峰面積換算為樣品中多糖肽的濃度，從而計(jì)算出樣品中的多糖肽含量。

所述靈芝產(chǎn)品包括靈芝原料藥和靈芝保健品。

本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明樣品前處理的方法簡(jiǎn)單快捷、省時(shí)省力；采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，能有效排除雜質(zhì)干擾，針對(duì)性強(qiáng)，有利于靈芝樣品中多糖肽成分的準(zhǔn)確定性與定量；本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，有利于靈芝樣品中保健成分的鑒定分析。

附圖說(shuō)明

圖1為靈芝多糖肽對(duì)照品色譜圖。

圖2為靈芝多糖肽對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

圖3為靈芝多糖肽對(duì)照品的精密度試驗(yàn)重疊色譜圖。

圖4為靈芝樣品重現(xiàn)性試驗(yàn)的重疊色譜圖。