[發明專利]一種重組人柯薩奇病毒B組蛋白及其應用

有效

• 申請號: 201410098277.2
• 申請日: 2014-03-17
• 公開（公告）號: CN103834671A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 張秀杰;華艷;張曉剛
• 申請（專利權）人: 北京英諾特生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/41
• 分類號: C12N15/41;C07K14/085;C12N15/70;C12N1/20;C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/19
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 呂世靜

技術領域

本發明涉及基因工程、疫苗研制和診斷試劑等領域，具體地涉及一種編碼重組人柯薩奇病毒B組蛋白的重組DNA，一種重組人柯薩奇病毒B組蛋白及其應用。

背景技術

柯薩奇病毒（Coxsackievirus）是一種腸病毒（enteroviruses），分為A和B兩類，是常見的經呼吸道和消化道感染人體的病毒。感染后人會出現發熱、打噴嚏、咳嗽等感冒癥狀。妊娠期感染可引起非麻痹性脊髓灰質炎性病變，并致胎兒宮內感染和致畸。

柯薩奇病毒A組有23型病毒，B組有6型病毒。通過型特異性抗原，經中和試驗，ELISA方法等可以對各型進行鑒定。

柯薩奇病毒所有的B組及A組的第9型有共同的組特異性抗原，在B組內病毒之間有交叉反應，但是A組病毒沒有共同的組特異性抗原。A組某些型別的型特異性抗原可在37℃引起人類O型紅細胞凝集反應。

柯薩奇B組病毒（coxsackievirusgroupB，CVB）感染自1954年在美國紐約州柯薩奇鎮發生及被報道以來，除引起新生兒散發感染外，也陸續在世界的某些地區發生了多次流行。主要侵犯免疫力低下的圍生兒。柯薩奇B組病毒包括柯薩奇B1，柯薩奇B2，柯薩奇B3，柯薩奇B5幾種病毒。

柯薩奇B組病毒是微小RNA病毒科腸道病毒屬成員，病毒性心肌炎的病例中大約有20%-25%是由柯薩奇B組病毒引起。CVB的致病機制十分復雜，病毒基因組以及病毒蛋白均在病毒致病過程中發揮重要作用。因此，對柯薩奇B組病毒的基因組、結構蛋白以及某些非結構蛋白與靶細胞內分子間相互作用生物信息的認識是闡述該病分子機制的基礎。

實驗室檢查是本病早期和確定診斷的主要依據，主要包括病毒分離，血清學特異性抗體的檢測等。但分離培養耗時長，必須在早期進行分離才能提高病原體的陽性檢出率。

發明內容

本發明的目的是提供一種編碼重組人柯薩奇病毒B組蛋白的重組DNA，提供一種重組人柯薩奇病毒B組蛋白，提供一種重組人柯薩奇病毒B組蛋白的制備方法，提供一種檢測人柯薩奇病毒B組感染的試劑盒，以及提供一種將所述重組人柯薩奇病毒B組蛋白用于檢測人柯薩奇病毒B組感染的用途。

本發明提供了一種編碼重組人柯薩奇病毒B組蛋白的重組DNA，該重組DNA的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。

本發明提供了一種包含所述重組DNA的人柯薩奇病毒B組蛋白的表達載體，它是將權利要求1所述的重組DNA插入到質粒pET-30a上得到的重組pET-30a-COXB質粒，其質粒圖譜如附圖2所示。

本發明提供了一種重組人柯薩奇病毒B組蛋白，它由所述重組DNA編碼，其氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。

本發明提供了一種重組人柯薩奇病毒B組蛋白的制備方法，包括以下步驟：

1）獲得具有SEQIDNO:1所示核苷酸序列的重組DNA；

2）將所述重組DNA導入質粒，構建表達載體；

3）將所得到的重組質粒導入原核宿主細胞；；

4）在有利于所述核苷酸序列表達的條件下培養所述宿主細胞，表達由所述重組DNA編碼的重組人柯薩奇病毒B組蛋白；

5）回收、純化及復性所表達的重組蛋白。

所述原核宿主細胞是大腸桿菌細胞，優選BL21（DE3）菌株。

所述質粒優選為pET-30a質粒。

上述步驟4）中的培養條件為：37℃培養3小時后（轉速200r/min），加入誘導劑（終濃度為1mmol/mL），37℃誘導表達5小時（轉速200r/min）。

本發明提供了一種表達重組人柯薩奇病毒B組蛋白的工程菌株，該菌株含有所述表達載體pET-30a-COXB，該工程菌株是大腸埃希氏菌EscherichiacoliYNTpET-30a-COXB，其菌種保藏號為CGMCCNo.8892，該菌株于2014年03月05日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101。

本發明提供了一種檢測人柯薩奇病毒B組感染的試劑盒，其組分中的抗原是本發明所述的重組人柯薩奇病毒B組蛋白，用于標記所述重組人柯薩奇病毒B組蛋白的標記物選自膠體金或辣根過氧化物酶（HRP）。