[發明專利]口蹄疫病毒非結構蛋白抗體酶聯免疫檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201410092728.1
• 申請日: 2014-03-13
• 公開（公告）號: CN103864906B
• 公開（公告）日: 2017-01-04
• 發明（設計）人: 肖進;齊鵬;董春娜;王楠;趙洪濤;張蕾;張欣;張艷賓;張君;李鳳鳴;鄭應華
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: C07K14/09
• 分類號: C07K14/09;G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢,王慧鳳

技術領域

本發明屬于生物技術領域，更具體地，本發明涉及一種口蹄疫病毒結構蛋白抗體酶聯免疫檢測試劑盒，特別是口蹄疫病毒結構蛋白VP1抗體酶聯免疫檢測試劑盒。

背景技術

口蹄疫(Foot-and-Mouth?Disease，FMD)是世界范圍內廣泛分布，在國際間傳播蔓延的全球性流行性傳染病。國際獸醫局(OIE)在1984年修訂的動物傳染病分類中將口蹄疫列為A類傳染病之首。口蹄疫是由口蹄疫病毒感染引起偶蹄目動物發生的烈性傳染病。常在牛群及豬群大范圍流行。口蹄疫的致死率很低，但是感染率很高。發病的主要癥狀為：口腔粘膜、舌、唇、鼻鏡、蹄叉、乳頭等部位發生水皰，破潰形成爛斑，病畜蹄痛臥地、嚴重者蹄殼邊緣潰裂或脫殼。不同動物的癥狀稍有不同，妊娠母牛可能流產，而后導致繁殖力降低；豬則以破蹄為最主要癥狀；山羊和綿羊的癥狀通常比牛溫和。口蹄疫傳染性高，傳播迅速，感染豬、牛、羊等牲畜常導致幼畜死亡，成年動物生產能力急劇下降，嚴重危害畜牧業的發展和畜產品的生產供應。同時會引發流行國家或地區動物及動物產品的市場流通，并使其國際貿易受到及大的封鎖和限制，給流行國家和地區的畜牧業生產造成了巨大經濟的損失。因此口蹄疫歷來受到各國政府的高度重視。

口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth?Disease?Virus，FMDV）屬于小核糖核酸病毒，該群病毒的其他成員包括普通感冒病毒和天花病毒等。口蹄疫病毒（FMDV）具有多型性、易變性等特點。目前，已知全世界有7個血清型：A、O、C、Sat1(南非I型)、Sat2(南非II型)、Sat3(南非III型)和AsiaI(亞洲I型)。每個型又分若干亞型，目前發現的亞型有70多個。由于不斷發生抗原漂移，因此并不能嚴格區分亞型。FMDV由一條核酸RNA鏈和衣殼蛋白組成，基因組RNA全長約8.5kb，可直接作為信使RNA，FMDV基因組RNA由5’UTR、3’UTR和OFR組成。5’UTR長約1300nt，含有VPg、二級結構、P10基因、Poly(c)區段和內部核糖體進入位點等(IRES)。3’UTR由Poly(A)尾和大ORF3’末端與Poly(A)區段5’末端之間92個nt殘基組成，長172nt。大ORF由L基因(P20a)、P1結構蛋白基因、P2和P3非結構蛋白基因以及起始密碼子和終止密碼子組成。以L、P1、P2和P3的順序依次排列，長約6.5Kb。其中基因組的3D區段是編碼FMDV的RNA聚合酶的，是病毒復制中不可缺少的成分。P1結構蛋白基因編碼4中主要的結構蛋白VP1、VP2、VP3和VP4，它們各60個組成了FMD的外殼蛋白。

口蹄疫病毒基因所編碼產生的非結構蛋白有L、2A、2BC、3AB、3ABC、3D等，其中L蛋白的免疫原性比其他非結構蛋白弱，感染動物不一定能產生抗體，即使產生抗體，維持的時間也比較短。病毒感染動物可產生抗2B抗體，但這種抗體在ELISA反應中重復性不好，不能作為檢測抗體。2C抗體由于消退的比3ABC快，且免疫牛中可檢測到2C抗體，因此也不能作為檢測指標。3D又稱病毒感染相關抗原，沒有型特異性，檢測其抗體水平是評價動物是否接觸過抗原的重要指標，也是國際貿易必檢項目。目前認為僅檢測3D抗體不能區分感染動物與免疫動物，因為疫苗中往往含有痕量的非結構抗原,經過多次免疫后,在免疫動物體內也能檢測到3D抗體。3ABC聚蛋白中，3A免疫原性最強，3C免疫原性較弱。許多資料認為3ABC作為感染的標志可信度較大。檢測3ABC抗體是確診感染的重要指標。

目前，口蹄疫的防治主要依靠疫苗免疫。我國對口蹄疫施行強制性免疫，每年春秋進行一次集中免疫，兩次之間對新補欄家畜及時進行補免。在實際生產中如何鑒別診斷易感動物是進行了疫苗免疫還是感染了口蹄疫病毒對口蹄疫防疫體系的建立、檢驗檢疫都是十分重要的。世界各國也在該領域開展了廣泛的研究。ELISA方法具有特異、敏感、快速、簡便、可靠性好等特點，且能自動化操作，并能迅速的檢測大量樣品，在FMD的診斷中日益受到人們的重視，現已成為國際上檢測易感動物豬、牛等是否疫苗免疫或感染病毒的常規方法之一。