[發明專利]一種DL-高半胱氨酸可視識別的新方法

有效

• 申請號: 201410090374.7
• 申請日: 2014-03-13
• 公開（公告）號: CN103901211A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 涂濤;房微魏;劉叢;朱海波;陸正未
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 張磊

技術領域

本發明屬于生物小分子可視識別應用技術領域，具體涉及使用一類鉗型有機鋅金屬絡合物在DL-高半胱氨酸的同時存在下，通過選擇性金屬水凝膠再形成實現了對DL-高半胱氨酸的裸眼可視識別的新方法。?

技術背景

DL-高半胱氨酸和L-半胱氨酸是生物體內僅有的兩種含有巰基的氨基酸，它們都具有非常重要的生理功能。例如，DL-高半胱氨酸在生物體內的總濃度是疾病的重要標志，在臨床上，高半胱氨酸已被公認作為心血管疾病，特別是冠狀動脈粥樣硬化和心肌梗塞的危險指標，它的濃度升高程度與疾病的危險性成正比。而L-半胱氨酸，作為一種主要的抗氧化劑，參與生物體內細胞的還原過程，具有抗衰老，調節肝臟內磷脂的代謝和保護肝臟細胞免受毒物損害等生理功能。L-半胱氨酸在生物體濃度的過低則會引起兒童生長緩慢，脫發，消瘦，肝損害等綜合癥。除此之外，作為由L-半胱氨酸和其他氨基酸結合形成的一種含有巰基的三肽，谷胱甘肽廣泛也存在于生物體內，具有抗氧化，抗癌，整合解毒等作用，提高生物體的免疫能力。基于以上，我們可以發現，這些巰基生物小分子各自在生物體內的濃度要求是不一樣的，因而，分別檢測識別這些含巰基生物小分子，特別是DL-高半胱氨酸，具有非常重要的臨床和理論研究意義。然而，由于DL-高半胱氨酸和L-半胱氨酸，谷胱甘肽具有類似的結構式（圖1），如何快速、簡單的從這三種結構類似的化合物中識別出DL-高半胱氨酸，則是一項非常具有挑戰性的工作。目前用于檢測識別DL-高半胱氨酸的方法主要有紫外-可見吸收光譜，熒光光譜，色譜分離，質譜，毛細管電泳，免疫分析等方法。然而，這些方法都需要使用精密的大型儀器及繁瑣的檢測步驟。除此之外，還沒有簡單、直接、快速、有效地識別DL-高半胱氨酸的方法，特別是裸眼可視識別的相關報道。所以如何快速簡便識別DL-高半胱氨酸有著非常重要的理論和實際應用意義。就目前現狀而言，對于生物小分子化合物進行快速簡便的裸眼可視識別仍是分析化學，生物化學的難題之一。?

??

本發明通過使用一類鉗型有機鋅金屬絡合物，盡管它本身并不能在水中形成金屬水凝膠，然而卻能夠與兩倍摩爾當量的單一種類的巰基生物小分子化合物共同作用生成穩定的水金屬凝膠。加入乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）絡合鋅離子后，可以實現這類金屬水凝膠的塌陷從而生成溶液。而只有在使用DL-高半胱氨酸的溶液中再次加入氯化鋅時，經過加熱冷卻的一系列的制膠操作，通過選擇性金屬水凝膠再形成實現了對DL-高半胱氨酸與L-半胱氨酸或谷胱甘肽的快速、簡便、裸眼可視識別。因此，通過使用一類鉗型有機鋅金屬絡合物與兩倍摩爾當量的DL-高半胱氨酸合用，通過選擇性金屬水凝膠再形成，本專利首次發展了對DL-高半胱氨酸從其他含巰基氨基酸中裸眼可視檢出的一種快速簡便的識別的新方法。

發明內容

本發明的目的是通過使用一類鉗型有機鋅金屬絡合物與兩倍摩爾當量的DL-高半胱氨酸合用，通過選擇性金屬水凝膠再形成，實現對DL-高半胱氨酸從其他含巰基氨基酸種裸眼可視檢出的一種快速簡便的識別的新方法。?

本發明使用的一種鉗型有機鋅金屬絡合物1，其表達式為NNN-Zn-Cl₂，其中，NNN表示與鋅配位的三聯吡啶配體，具體結構如下所示：?

本發明使用的一種鉗型有機鋅金屬絡合物1的制備方法，其過程如下：

在250?mL?的圓底燒瓶中，分別加入三齒氮配體（1?-?10?mmol）、無水氯化鋅（1?-?12?mmol）和無水甲醇，三齒氮配體與無水氯化鋅的物質的量比為1：1～1.2。在室溫下攪拌反應24小時，反應體系中有白色固體形成，過濾得到白色固體，用無水甲醇洗滌3遍，真空干燥，得到相應的鉗型有機鋅金屬絡合物1。其反應式如下：

將得到的鉗型有機鋅金屬絡合物1應用于DL-高半胱氨酸的裸眼可視識別，具體步驟如下：