[發明專利]一種雞艾美耳球蟲卵囊分離純化的工業化生產方法

無效

• 申請號: 201410082352.6
• 申請日: 2014-03-07
• 公開（公告）號: CN103881913A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 吳彩艷;孫銘飛;戚南山;廖申權;呂敏娜;李娟;謝明權;溫列娜
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院動物衛生研究所
• 主分類號: C12N1/10
• 分類號: C12N1/10;C12R1/90
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

技術領域

本發明涉及雞艾美耳球蟲卵囊分離純化的工業化生產方法。

背景技術

雞球蟲病（Coccidiosis）是由艾美耳屬（Eimeria）的一種或幾種球蟲（Coccidium）同時或先后寄生于雞腸道黏膜細胞所引起的疾病。世界上凡是有養雞的地方就會有球蟲病的發生，而規模化雞場是雞球蟲病易發生的適宜場所，常常出現該病的爆發。據統計，全世界已報道的雞球蟲共有15種，其中，有5種具有明顯的致病性，它們是：柔嫩艾美耳球蟲(E.tenella)、毒害艾美耳球蟲(E.necatrix)、巨型艾美耳球蟲(E.maxima)、堆形艾美耳球蟲(E.acervulina)?及和緩艾美耳球蟲(E.mitis)。雛雞和青年雞易感染球蟲，發病率和致死率高達80%以上，病愈的雛雞生長受阻，增重緩慢；成年雞一般不發病，但為帶蟲者，增重和產蛋能力降低，是傳播球蟲病的重要病源。因此，雞球蟲病對養禽業造成嚴重的經濟損失，全球每年因該病造成的損失高達數百億美元，我國每年因該病造成的經濟損失不少于100?億元。

????在養雞業集約化程度日益提高的今天，雞球蟲病的防控也越來越重要。在上世紀80?年代，大量抗球蟲藥物的出現，使得雞球蟲病的防控取得令人滿意的成效。然而，大多數抗球蟲藥物多為化學類產品和抗生素類產品，這些產品的長期使用必然導致抗藥性和藥物殘留現象的出現。而各種抗球蟲藥物的使用均為伴料給藥，實際上在上世紀90?年代抗藥現象已十分普遍，而新藥研發的速度又十分緩慢，養雞業面臨無藥可用的局面。進入21?世紀以來，全球范圍內化學藥品和抗生素的使用受到限制，食品安全制度受到越來越多的關注，發達國家已基本禁止了化學抗球蟲藥物的使用，抗生素類抗球蟲藥物的使用也受到明顯的限制，在美國、日本和歐共體已明令禁止此類產品出現在飼料中。我國也意識到在飼料中添加抗球蟲藥的危害，現在已經禁止部分抗球蟲藥添加在飼料中，這也使雞球蟲病的防治形勢愈加緊張。

為了有效防治雞球蟲病，確保養雞業的健康發展，目前疫苗接種預防被視為最理想的防控措施。現在世界上使用的球蟲疫苗均為活卵囊疫苗。傳統上使用的卵囊的純化技術費時、費力，不適用于產業化生產，急切需要適用于規模化生產的技術工藝。

發明內容

本發明的目的在于提供一種雞艾美耳球蟲卵囊純化的工業化生產方法。

本發明所采取的技術方案是：

一種雞艾美耳球蟲卵囊分離純化的工業化生產方法，包括如下步驟：

（1）糞樣處理：收集雞感染球蟲后第120～192h的糞便，加水重懸糞便，浸泡1～3h后，通過自流方式，使糞便混合液利用自身壓力差，壓入碟片分離機，離心收集沉淀，碟片分離機的離心條件為2500～3500g/min，離心8～12min；

（2）經過碟片離心機后的上清再次利用蠕動泵經過管式離心機，離心收集沉淀，管式離心機的離心條件為2500～3500g/min，離心8～12min；

（3）將兩次離心的沉淀混合，向沉淀中加入2～4倍體積的飽和鹽水，通過自流方式，使糞便混合液利用自身壓力差，壓入碟片分離機，離心收集上清，碟片分離機的離心條件為1500～2500g/min，離心8～12min；

（4）上清中加入3～5倍飽和鹽水體積的水，碟片離心機離心，收集沉淀，沉淀即為卵囊，用水洗滌后，沉淀用重鉻酸鉀溶液重懸，置25～30℃，待卵囊孢子化率達到80～90%后，收集卵囊，通過碟片離心機棄重鉻酸鉀溶液，碟片分離機的離心條件為2500～3500g/min，離心8～12min；

（5）以水重懸洗滌卵囊，然后以次氯酸鈉溶液重懸卵囊，管式離心機離心，2500～3500g/min，離心8～12min，離心沉淀物即為純化的孢子化卵囊，再次以水重懸洗滌，除去次氯酸鈉溶液，然后以重鉻酸鉀溶液重懸孢子化卵囊低溫保存備用。

作為優選的，步驟（1）加入水的量為糞便的5～15倍體積。

作為優選的，所述重鉻酸鉀溶液的濃度為2.5%，按質量百分比計。

作為優選的，步驟（5）所述次氯酸鈉溶液的濃度為20～30%，按質量百分比計。

進一步優選，所述氯酸鈉溶液的濃度為25%，按質量百分比計。

步驟（4）和步驟（5）所述低溫保存是在置于4℃保存。

本發明的有益效果是：

（1）本發明方法縮短了卵囊分離純化時間，與傳統技術相比，節省時間70%以上；