[發明專利]抗乙型肝炎病毒X蛋白多肽藥物

無效

• 申請號: 201410074354.0
• 申請日: 2011-03-15
• 公開（公告）號: CN103992388A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 張曉東;葉麗虹
• 申請（專利權）人: 天津托普泰克生物科技有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C12N15/11;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;A61K38/10;A61K48/00;A61P1/16;A61P31/20
• 代理公司: 北京泛誠知識產權代理有限公司 11298
• 代理人: 陳波;吳立

技術領域

本發明涉及多肽藥物領域，具體涉及抗乙型肝炎病毒X蛋白的多肽和編碼此多肽的多核苷酸，以及它們的應用。?

背景技術

肝癌是導致病人死亡的惡性腫瘤之一，其惡性程度高，在我國肝癌死亡率僅次于胃癌，居我國惡性腫瘤死亡率第二位。據統計，我國每年新增肝癌人數30萬人，而每年肝癌死亡人數達11萬。乙型肝炎病毒(hepatitis?B?virus，HBV)感染可導致肝炎、肝硬變和原發性肝癌的發生，在我國80％以上的肝癌患者為乙肝感染后肝癌，可稱之為乙肝后肝癌。?

HBV為長約3.2Kb的DNA病毒，其開放閱讀框表達乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)、乙型肝炎病毒多聚酶和乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)(或稱之為乙型肝炎病毒X蛋白,即HBx)，其中HBx是HBV?DNA復制所必須的因子。由于HBx是HBV?DNA復制所必須的因子,因此抑制HBx的功能，意味著可抑制HBV的感染，以及由此導致的肝炎和肝硬變。?

另外，HBx作為反式作用因子，促進肝癌的生長和增殖，稱之為癌蛋白。在分子水平、細胞水平和動物水平的研究也發現，HBx具有很強的促肝癌細胞增殖和遷移的作用。轉基因鼠實驗也證明HBx具有顯著的促進肝癌發生的作用。大量研究結果顯示，HBV感染的持續存在可導致慢性肝病，包括慢性肝炎、慢性肝炎反復發作引起的肝組織中纖維結締組織增生后發生的肝硬變，及大部分在肝硬變基礎上發生?的肝癌。在慢性肝病(包括肝炎、肝硬變和肝癌)的發生發展過程中，HBx發揮了重要的作用。因此，HBx是預防和治療肝病的重要靶點。?

目前，肝癌的治療以手術為主，輔以介入療法，而化療效果不理想。在臨床手術的肝癌組織中HBsAg和HBxAg的表達陽性檢出率高達80％甚至90％以上。因此，HBx作為肝癌發生發展的重要致病因子，而發現其特異性抑制劑，則具有重要的理論意義和實際臨床應用價值。然而，由于目前HBx的三維構象解析尚未完成，故難以通過HBx立體三維構象設計其化學抑制劑。?

多肽片段可作為藥物，其在臨床上已廣為應用。例如，胸腺肽(thymopeptide)是從小牛胸腺中提取的胸腺五肽，具有促進淋巴細胞轉化、增強巨噬細胞吞噬活性的作用，可用于治療多種免疫缺陷病。多肽藥物的特點是藥理作用明確，安全性高，并易于生產。但是，多肽藥物的發現難度大，其原因在于大部分的多肽片段在體內的半衰期短，直接影響藥效學作用。?

發明內容

本發明涉及一種具有抑制乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis?B?virus?X?protein,HBx)功能活性的多肽，其在分子水平、細胞水平和動物水平上具有抑制HBx的活性，因而能抑制乙型肝炎病毒感染所造成的肝炎，由肝炎反復發作引起的肝硬變，以及在肝硬變基礎上發生的肝癌。該多肽和它的肽模擬物，包括它們的功能片段和功能變體，以及編碼這些多肽、肽模擬物或它們的功能片段、功能變體的基因，可廣泛用于防治乙型肝炎感染后的肝病，包括肝炎、肝硬變和肝癌。?

一方面，本發明提供了分離的多肽或肽模擬物，其包含如SEQ?ID?NO:1所示的氨基酸序列、或其功能片段或功能變體，所述多肽或肽模擬物具有抑制乙型肝炎病毒X蛋白的功能，并能抑制乙型肝炎病毒感染后的慢性肝病的發生和發展。所述乙肝病毒感染后的慢性肝病可以?包括肝炎，由肝炎反復發作引起的肝硬變，以及在肝硬變基礎上發生的肝癌。?

在本發明的一些具體實施例中，上述多肽或肽模擬物，其包含的氨基酸序列、其功能片段或功能變體可以具有與SEQ?ID?NO:1所示的氨基酸序列至少70％，或者80％，或者90％，以及甚至更高的相同性。優選地，這些多肽或肽模擬物包含如SEQ?ID?NOs:1-6中所示的任一種氨基酸序列。?

另一方面，本發明提供分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含編碼如SEQ?ID?NO:1所示的氨基酸序列、其功能片段或功能變體的多核苷酸；或者是與包含編碼如SEQ?ID?NO:1所示的氨基酸序列、其功能片段或功能變體的多核苷酸互補或嚴格雜交的多核苷酸。優選地，這些多核苷酸為編碼SEQ?ID?NOs:1-6所示的氨基酸序列的多核苷酸，或者為與編碼SEQ?ID?NOs:1-6所示的氨基酸序列的多核苷酸互補或嚴格雜交的多核苷酸。?