[發明專利]一種星柳珊瑚甾體皂苷的制備方法

有效

• 申請號: 201410069695.9
• 申請日: 2014-02-27
• 公開（公告）號: CN103936810A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 陸亞男;樊成奇;田曉清;楊橋;崔萍
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院東海水產研究所
• 主分類號: C07J17/00
• 分類號: C07J17/00;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達

技術領域

本發明屬于甾體皂苷領域，特別涉及一種星柳珊瑚甾體皂苷的制備方法。

背景技術

柳珊瑚，屬于腔腸動物門珊瑚綱八放珊瑚亞綱動物，在《本草綱目》中有詳細記載，是中藥寶庫的重要組成部分。為了尋找有重要生物活性和藥用前景的海洋天然產物，20世紀60年代，美國Weinheimer等從柳珊瑚中發現了具有獨特結構和強烈生理活性的前列腺素前體，世界各國的科學工作者先后從不同海域的珊瑚中已先后提取分離了脂類、甾體、生物堿以及多種骨架類型的萜類等成分，多數化合物的結構新穎獨特，有較強的抗腫瘤、抗結核、抗炎等生物活性。其中，甾體皂苷是一大類具有特殊生物活性的重要海洋天然產物。

海洋甾體皂苷類成分的常規提取、制備方法一般包括以下過程：（1）海洋生物切片粉碎，或凍干個體粉碎，然后用有機溶劑或/和水提取制備得到總提取物，所用的有機溶劑可采用醇類，如乙醇，甲醇；將總提取物溶于水或甲醇水溶液后，以較高沸點烷烴（石油醚、正己烷、環己烷），或乙酸乙酯等酯類、氯仿或二氯甲烷等鹵代烴類溶劑萃取脫除脂溶性的中、低極性成分。（2）水相用不和水混溶的高極性溶劑萃取，回收溶劑后干燥即得到總皂苷，其中所用的高極性溶劑優選采用正丁醇或者不同比例的氯仿-甲醇混合溶液；萃取得到的總皂苷可以通過大孔樹脂吸附、甲醇或者乙醇水溶液梯度洗脫，獲得較為精制的皂苷混合物。水相也可以直接通過大孔樹脂吸附、甲醇或者乙醇水溶液梯度洗脫獲得較為精制的皂苷混合物。（3）皂苷混合物通過正相、反相硅膠柱色譜等進行純化獲得純甾體皂苷化合物。

不同結構的海洋甾體皂苷具體提取、制備方法具有特殊性。利用星柳珊瑚（Astrogorgia?dumbea）提取、制備甾體皂苷dimorphoside?A，以及dimorphoside?A的體外抗腫瘤活性目前尚無文獻公開報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種星柳珊瑚甾體皂苷的制備方法，該方法純化工藝簡單，成本低，可有效制備在生物醫藥領域具有潛在用途的純化合物dimorphoside?A。

本發明的一種星柳珊瑚甾體皂苷的制備方法，包括：

（1）采用甲醇提取星柳珊瑚，總提取物加水成混懸液，依次加石油醚、氯仿萃取，然后將水相濃縮，通過MCI柱層析分離，依次以60%、100%甲醇水溶液洗脫，取甲醇洗脫部分減壓濃縮回收溶劑后干燥，得到星柳珊瑚總皂苷；

（2）星柳珊瑚總皂苷用100～200目硅膠拌勻，經200～300目硅膠柱色譜分離，依次以體積比為12:1、8:1、6:1的氯仿-甲醇、體積比為50:10:1、40:10:1、30:10:1、14:6:1的氯仿-甲醇-水梯度洗脫，薄層色譜（TLC）檢測各餾分，相同組分合并濃縮，得到7個粗皂苷混合物；

（3）取硅膠柱色譜分離得到的第6個粗皂苷混合物溶解于無水乙醇中形成300-500mg/mL溶液，進行Sephadex?LH-20凝膠柱分離，收集主要成分合并濃縮得到甾體皂苷。

所述步驟（1）中的星柳珊瑚原料與水的質量體積比為1kg:1L-5kg:1L，優選3kg:1L。

所述步驟（1）中的星柳珊瑚原料與石油醚以及氯仿的質量體積比為8kg:1L-12kg:1L，優選9kg:1L，萃取次數為3-5次，優選4次。

所述步驟（1）中的MCI柱層析分離的上樣水溶液的體積為每公斤星柳珊瑚原料60mL-100mL，MCI柱床體積為每公斤星柳珊瑚原料80mL-100mL，60%、100%甲醇水溶液的用量為每公斤星柳珊瑚原料300mL-500mL。

所述步驟（2）中的100～200目硅膠用量為星柳珊瑚總皂苷質量的1-1.5倍；200～300目硅膠的用量為星柳珊瑚總皂苷質量的10-15倍；每份氯仿-甲醇用量為星柳珊瑚總皂苷質量的40-60倍；每份氯仿-甲醇-水用量為星柳珊瑚總皂苷質量的25-40倍。

所述步驟（3）中的Sephadex?LH-20凝膠柱分離具體為：按照每50-80mL柱床體積1mL樣品溶液的比例上樣，經無水乙醇洗脫，TLC檢測各餾分，收集在體積比為40:10:1的氯仿-甲醇-水體系中Rf值為0.3的成分合并，減壓濃縮回收無水乙醇，即可。

所述步驟（3）中得到的甾體皂苷用于抗腫瘤藥物的制備。

所述甾體皂苷用于肝癌和早幼粒細胞白血病抗腫瘤藥物的制備。

本發明中制備柳珊瑚甾體皂苷dimorphoside?A結構經核磁、質譜等波譜學方法以及與文獻數據對照鑒定，產率大于等于0.03％。