[發(fā)明專利]一種動態(tài)調(diào)控蘇氨酸外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因表達(dá)生產(chǎn)L-蘇氨酸的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410050917.2
• 申請日: 2014-02-14
• 公開（公告）號: CN104845995B
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 溫廷益;劉樹文;梁勇;劉茜;溫際富
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N1/21;C12P13/08;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.一種構(gòu)建重組菌的方法，為如下A或B：

A所示的方法包括如下步驟：將阻遏蛋白基因表達(dá)元件和蘇氨酸外排基因表達(dá)元件導(dǎo)入出發(fā)細(xì)菌中，得到重組菌；

B所示的方法包括如下步驟：將阻遏蛋白基因表達(dá)元件、蘇氨酸外排基因表達(dá)元件和突變蘇氨酸操縱子表達(dá)元件導(dǎo)入出發(fā)細(xì)菌中，得到重組菌；

所述蘇氨酸外排基因表達(dá)元件包括蘇氨酸外排基因、驅(qū)動蘇氨酸外排基因表達(dá)的誘導(dǎo)型啟動子和位于二者之間的調(diào)控區(qū)；

所述阻遏蛋白基因表達(dá)元件包括阻遏蛋白基因及驅(qū)動阻遏蛋白基因表達(dá)的啟動子；

所述突變蘇氨酸操縱子表達(dá)元件包括突變蘇氨酸操縱子和驅(qū)動突變蘇氨酸操縱子表達(dá)的啟動子；

所述蘇氨酸外排基因?yàn)橄率?1)或(2)或(3)：

(1)rhtC；

(2)rhtC和rhtB；

(3)rhtC、rhtB和rhtA；

所述驅(qū)動蘇氨酸外排基因表達(dá)的誘導(dǎo)型啟動子為P_T5；

所述調(diào)控區(qū)為Ocmt；

所述驅(qū)動阻遏蛋白基因表達(dá)的啟動子為P_km；

所述突變蘇氨酸操縱子為突變蘇氨酸操縱子thrA^C1034TBC；

所述驅(qū)動突變蘇氨酸操縱子表達(dá)的啟動子為P_PL；

所述P_T5的核苷酸序列為序列表中的序列3或4或5自5’末端第1-59位核苷酸；

所述Ocmt的核苷酸序列為序列表中的序列3或4或5自5’末端第60-91位核苷酸；

所述P_PL的核苷酸序列為序列表中的序列1自5’末端第520-687位核苷酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：

B所示的方法中，所述導(dǎo)入方式為如下1)或2)：

1)將所述阻遏蛋白基因表達(dá)元件、所述蘇氨酸外排基因表達(dá)元件和所述突變蘇氨酸操縱子表達(dá)元件通過重組載體A導(dǎo)入出發(fā)細(xì)菌中，得到重組菌；

所述重組載體A為將所述阻遏蛋白基因表達(dá)元件、所述蘇氨酸外排基因表達(dá)元件和所述突變蘇氨酸操縱子表達(dá)元件插入表達(dá)載體中得到的載體；

2)將所述阻遏蛋白基因表達(dá)元件和所述蘇氨酸外排基因表達(dá)元件通過重組載體B導(dǎo)入出發(fā)細(xì)菌中，且將所述突變蘇氨酸操縱子表達(dá)元件通過同源重組導(dǎo)入所述出發(fā)細(xì)菌中，得到重組菌；

所述重組載體B為將所述阻遏蛋白基因表達(dá)元件和所述蘇氨酸外排基因表達(dá)元件插入表達(dá)載體中得到的載體；

所述同源重組為將突變蘇氨酸操縱子表達(dá)元件以含有突變蘇氨酸操縱子表達(dá)元件的片段的形式同源重組到所述出發(fā)細(xì)菌中。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述rhtC的核苷酸序列為序列表中的序列3自5’末端第92-835位核苷酸或序列表中的序列4自5’末端第92-733位核苷酸或序列表中的序列5自5’末端第92-733位核苷酸；

所述rhtA的核苷酸序列為序列表中的序列4自5’末端第734-1706位核苷酸或序列表中的序列5自5’末端第734-1637位核苷酸；

所述rhtB的核苷酸序列為序列表中的序列5自5’末端第1638-2342位核苷酸；

所述P_km的核苷酸序列為序列表中的序列2自5’末端第1-144位核苷酸；

所述阻遏蛋白基因的核苷酸序列為序列表中的序列2自5’末端第145-917位核苷酸；

所述突變蘇氨酸操縱子thrA^C1034TBC的核苷酸序列為序列表中的序列1自5’末端第688-5654位核苷酸。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述阻遏蛋白基因表達(dá)元件的核苷酸序列為序列表中的序列2；

所述蘇氨酸外排基因表達(dá)元件的核苷酸序列為序列表中的序列3或序列4或序列5；

所述突變蘇氨酸操縱子表達(dá)元件的核苷酸序列為序列表中的序列1自5’末端第520-5654位核苷酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述含有突變蘇氨酸操縱子表達(dá)元件的片段的核苷酸序列為序列表中的序列1。